發(fā)布時間：2020-06-14 23:01

【摘要】：本研究以藥用植物天門冬為試驗材料,在了解其種子萌發(fā)特性與種子預(yù)處理方法基礎(chǔ)上,對其愈傷組織誘導(dǎo)與增殖、叢生芽誘導(dǎo)與成苗、壯苗與生根、煉苗與移栽等條件進(jìn)行了系統(tǒng)探索,初步構(gòu)建了天門冬離體快繁技術(shù)體系。主要研究結(jié)果如下:(1)以天門冬成熟種子為試驗材料,研究不同濃硫酸處理時間、不同溫水浸泡時間、不同植物生長調(diào)節(jié)劑及不同培養(yǎng)條件對天門冬種子無菌萌發(fā)的影響。結(jié)果表明:天門冬種子經(jīng)過濃硫酸預(yù)處理4-8 min;35℃溫水浸泡4-6 h;酒精滅菌0.5 min,0.1%升汞滅菌3 min;接種于MS+6-BA 2.0 mg·L~(-1)+GA_3 0.5 mg·L~(-1)+蔗糖30 g·L~(-1);暗培養(yǎng)3 d,后轉(zhuǎn)移至光照周期為12 h·d~(-1)、光照強(qiáng)度為2000 lx的環(huán)境中培養(yǎng)直至長成健壯的無菌芽苗;萌發(fā)率達(dá)83.49%;15 d后萌發(fā)的無菌芽苗適宜作為天門冬離體快繁體系構(gòu)建的外植體。(2)以天門冬種子經(jīng)過預(yù)處理后無菌萌發(fā)的芽苗為試驗材料,研究不同植物生長調(diào)節(jié)劑及其濃度對愈傷組織誘導(dǎo)與增殖的影響。結(jié)果表明:6-BA和NAA的不同濃度組合對愈傷組織誘導(dǎo)與增殖有顯著影響;愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方MS+NAA 0.5 mg·L~(-1)+6-BA 1.0 mg·L~(-1),誘導(dǎo)率達(dá)86.67%,誘導(dǎo)的愈傷呈現(xiàn)淡黃色,長勢良好;以誘導(dǎo)的淡黃色愈傷組織為試驗材料,篩選不同濃度的6-BA和NAA對愈傷組織增殖的影響。結(jié)果表明:適宜愈傷組織增殖的培養(yǎng)基配方為MS+NAA 2.0 mg·L~(-1)+6-BA 0.5 mg·L~(-1),增殖倍數(shù)為9.71,愈傷顏色淡黃,生長勢佳。(3)以增殖后的天門冬愈傷組織小塊為試驗材料,研究不同植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)及其濃度對叢生芽誘導(dǎo)的影響,結(jié)果顯示:MS培養(yǎng)基為適宜誘導(dǎo)叢生芽的基本培養(yǎng)基,6-BA、NAA和KT三種植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對叢生芽誘導(dǎo)有顯著影響;通過上述三種植物生長調(diào)節(jié)劑的正交試驗表明,叢生芽誘導(dǎo)的適宜培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+NAA 0.1 mg·L~(-1)+KT 0.2 mg·L~(-1),誘導(dǎo)率為91.11%,叢生芽顏色翠綠,長勢旺盛。(4)以誘導(dǎo)的天門冬叢生芽(3個為一簇)為材料,研究IAA和6-BA對芽伸長與加粗的影響。結(jié)果顯示:適宜壯苗的培養(yǎng)基配方為MS+IAA 1.0 mg·L~(-1)+6-BA 0.2 mg·L~(-1),平均苗高度為4.55 cm,苗健壯;以伸長健壯的無根苗為材料,研究不同大量元素濃度、NAA濃度對生根的影響,組合試驗結(jié)果顯示:生根培養(yǎng)基為1/2 MS+NAA 2.0 mg·L~(-1),誘導(dǎo)生根率達(dá)到84.44%,主根健壯,根系發(fā)達(dá)。(5)以天門冬組培苗為材料,研究不同煉苗時間和移栽基質(zhì)對組培苗成活的影響。結(jié)果顯示:開瓶煉苗時間和移栽基質(zhì)對組培苗成活有顯著影響;開瓶煉苗時間3 d為宜,基質(zhì)配方為泥炭土∶珍珠巖∶蛭石為2∶1∶1,移栽成活率達(dá)82.22%,組培苗生長狀況良好,有新葉長出。(6)本研究初步構(gòu)建的天門冬種苗離體快繁技術(shù)體系為:選取成熟健康的天門冬種子,依次經(jīng)濃硫酸處理4-8 min、35℃溫水浸泡4-6 h、75%乙醇處理0.5 min、0.1%升汞處理3 min,清水洗凈后,接種于MS+6-BA 2.0 mg·L~(-1)+GA_3 0.5 mg·L~(-1)+蔗糖30 g·L~(-1)的培養(yǎng)基上萌發(fā)培養(yǎng)。期間,先暗培養(yǎng)3 d,而后轉(zhuǎn)移至光照周期為12 h·d~(-1)、光照強(qiáng)度為2000 lx的條件下培養(yǎng),直至長成健壯的無菌芽苗。以萌發(fā)的無菌芽苗為外植體材料,以MS+NAA 0.5 mg·L~(-1)+6-BA 1.0 mg·L~(-1)培養(yǎng)基進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo),誘導(dǎo)獲得的愈傷組織轉(zhuǎn)移至MS+NAA 2.0 mg·L~(-1)+6-BA 0.5 mg·L~(-1)培養(yǎng)基繼續(xù)增殖培養(yǎng),篩選經(jīng)過增殖后長勢良好的愈傷組織并切成小塊,接種于MS+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+NAA 0.1 mg·L~(-1)+KT 0.2 mg·L~(-1)培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽的誘導(dǎo),選取翠綠且長勢良好的叢生芽剪切成3個一簇接種于MS+IAA 1.0 mg·L~(-1)+6-BA 0.2 mg·L~(-1)的培養(yǎng)基上進(jìn)行壯苗培養(yǎng),直至長成高度約5 cm的無根苗,將其接種于1/2 MS+NAA 2.0 mg·L~(-1)的生根培養(yǎng)基上,待其長出健壯根系后開瓶煉苗3 d,再移栽至泥炭土∶珍珠巖∶蛭石為2∶1∶1的基質(zhì)中,成苗率達(dá)80%以上。
【學(xué)位授予單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S567.239
【圖文】：

圖 2-1 預(yù)處理對種子萌發(fā)的效果Fig 2-1 Effect of pretreatment on Seed Germination1. 成熟種子；2. 預(yù)處理后的種子；3. 接種后的種子；4. 萌發(fā)的種子4 小結(jié)與討論4.1 小結(jié)通過外植體的選擇，消毒劑酒精 75%與 0.1%升汞消毒時間的選擇，發(fā)現(xiàn)天門冬種子是理想的外植體，易于操作，污染率低。但其萌發(fā)率和苗整齊度不一致。通過天門冬種子的萌發(fā)特性和預(yù)處理方法進(jìn)行研究，天門冬種子質(zhì)地堅硬，表面致密光滑，常規(guī)條件下萌發(fā)率低，經(jīng)過濃硫酸預(yù)處理 4-8 min，35℃溫水浸泡 4-6 h；酒精滅菌 0.5 min、0.1%升汞滅菌 3 min；暗培養(yǎng)時間為 3 d，光照培養(yǎng)的光照強(qiáng)度為 2000 lx，在 MS 培養(yǎng)基中添加 6-BA2.0 mg·L-1和 GA30.5 mg·L-1的條件下進(jìn)行無菌萌發(fā)培養(yǎng)。4.2 討論植物離體快繁體系建立的首要條件是獲得有活性的無菌材料，外植體的選擇具有至

貴州大學(xué) 2018 屆碩士研究生學(xué)位論文 天門冬組織培養(yǎng)及離體快繁體系構(gòu)建多重比較等，在統(tǒng)計結(jié)果中所涉及的測定項目計算公式如下：愈傷誘導(dǎo)率=(培養(yǎng) 14 d 誘導(dǎo)出愈傷外植體的個數(shù)/接種數(shù)) × 100%；愈傷增殖倍數(shù)=培養(yǎng) 20 d 愈傷組織濕重重量/接種時愈傷組織濕重重量；叢生芽誘導(dǎo)率=(培養(yǎng) 21 d 后誘導(dǎo)出 5 個以上芽的個數(shù)/接種數(shù)) ×100%；平均苗高度=(21 d 后最高苗高度+最低苗高度) ×1/2；生根率=(35 d 后生根的外植體個數(shù)/接種數(shù)) ×100%。平均生根數(shù)=35 d 后生根數(shù)總數(shù)/35 d 后生根的外植體個數(shù)；成活率=(30 d 后成活的試管苗/移栽的總試管苗數(shù)量) ×100%。3 結(jié)果與分析3.1 植物生長調(diào)節(jié)劑 NAA、6-BA 對愈傷組織誘導(dǎo)的影響

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2713489