【摘要】：大豆是我國重要的糧油作物,是優(yōu)質(zhì)植物蛋白和植物油的重要來源。它在國民經(jīng)濟(jì)發(fā)展中具有特殊的戰(zhàn)略地位。我國是大豆的原產(chǎn)地,大豆栽培歷史悠久,是目前世界四大大豆生產(chǎn)國之一。近年來,隨著我國人民生活水平的提高,對大豆的需求急劇增加。大豆產(chǎn)量常受極端天氣影響,其中干旱最容易造成大豆年產(chǎn)量的下降,如何克服干旱對大豆產(chǎn)量的影響成為當(dāng)前育種研究的一項(xiàng)主要工作。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)前期轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果,利用抗旱突變體M18克隆獲得的UDP-糖基轉(zhuǎn)移酶基因,以植物表達(dá)載體pCAMBIA3301(p3301)為基礎(chǔ)載體構(gòu)建了過表達(dá)載體和RNA干擾表達(dá)載體。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法,將構(gòu)建完成的重組載體轉(zhuǎn)入到大豆受體品種‘吉農(nóng)18’(JN18)中。將經(jīng)過PCR初步檢測的陽性轉(zhuǎn)基因植株種子在人工氣候室內(nèi)進(jìn)行加代,并對T_2代轉(zhuǎn)基因植株在外源基因的整合水平上進(jìn)行Southern blotting檢測,轉(zhuǎn)錄水平上的熒光定量PCR檢測以及室內(nèi)抗旱的初步鑒定,以期為轉(zhuǎn)基因大豆抗旱性的研究提供有效材料。主要研究結(jié)果如下:1、克隆得到目標(biāo)基因,并利用無縫克隆技術(shù)構(gòu)建了過表達(dá)載體p3301-GmA02G03420和RNA干擾表達(dá)載體p3301-GmA02G03420-RNAi。2、利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化大豆受體品種JN18。經(jīng)PCR檢測,得到T_0代轉(zhuǎn)p3301-GmA02G03420載體和p3301-GmA02G03420-RNAi載體的陽性植株分別有4株、2株。3、經(jīng)加代得到T_1代轉(zhuǎn)p3301-GmA02G03420載體陽性植株5株,轉(zhuǎn)p3301-GmA02G03420-RNAi載體陽性植株4株。在人工氣候室加代后經(jīng)PCR初步檢測得到T_2代轉(zhuǎn)p3301-GmA02G03420載體陽性植株12株,轉(zhuǎn)p3301-GmA02G03420-RNAi載體陽性植株10株。4、T_2代轉(zhuǎn)基因植株Southern blotting檢測結(jié)果表明,目標(biāo)基因以單拷貝的形式整合到大豆受體基因組中,雜交信號強(qiáng)度不同。5、熒光定量PCR結(jié)果表明轉(zhuǎn)過表達(dá)載體植株與對照相比表達(dá)量顯著提高,轉(zhuǎn)干擾表達(dá)載體與對照相比表達(dá)量顯著降低。6、抗旱性鑒定結(jié)果表明,轉(zhuǎn)過表達(dá)載體植株顯著提高了JN18的抗旱能力。
【圖文】：

圖 2.1 克隆載體的驗(yàn)證Fig.2.1 Verification of cloning vectors圖 2.2 GmA02G03420 測序結(jié)果Fig.2.2 Sequencing results of GmA02G03420網(wǎng)站進(jìn)行基因序列比對，并用 MEGA 軟件作圖。結(jié)果表酶 UGT74B1 基因（XM_003519384.4）同源性達(dá)到 10基轉(zhuǎn)移酶基因相似，以此方向進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)中基因功能

圖 2.2 GmA02G03420 測序結(jié)果Fig.2.2 Sequencing results of GmA02G03420CBI 網(wǎng)站進(jìn)行基因序列比對，，并用 MEGA 軟件作圖。結(jié)果表明該基基轉(zhuǎn)移酶 UGT74B1 基因（XM_003519384.4）同源性達(dá)到 100％。推與糖基轉(zhuǎn)移酶基因相似，以此方向進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)中基因功能的驗(yàn)證
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S565.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2654985