【摘要】：野生稻是天然的基因?qū)殠�。在野生稻的研究�?大多研究人員都通過分子遺傳學(xué)、細(xì)胞學(xué)或者生物信息學(xué)等方法探究野生稻的進(jìn)化關(guān)系和與栽培稻的親緣關(guān)系并挖掘野生稻的有利基因。本研究中,我們以不同組野生稻為供試材料,利用含有25000個(gè)寡核苷酸片段的日本晴第9號(hào)染色體探針庫(oligo-chr9)和45SrDNA探針對不同來源的野生稻進(jìn)行熒光原位雜交(FISH)分析,揭示了第9號(hào)染色體(chromosome 9,chr9)和45SrDNA在不同組野生稻之間的差異;同時(shí)我們還篩選到了能夠鑒定CC組野生稻染色體的著絲粒探針和覆蓋整個(gè)緊穗野生稻全基因組的SSR多態(tài)性分子標(biāo)記,為野生稻種質(zhì)資源的利用提供基礎(chǔ)。具體研究結(jié)果如下:1、本研究利用oligo-chr9與45S rDNA探針對不同染色體組野生稻的根尖細(xì)胞進(jìn)行FISH分析。研究結(jié)果表明斑點(diǎn)野生稻(YS7020,BB)染色體數(shù)為2n=24,oligo-chr9探針信號(hào)有2個(gè),45S rDNA探針信號(hào)有4個(gè),其中分布在chr9的1對信號(hào)較強(qiáng),另1對信號(hào)較弱。小粒野生稻(YS7021,BBCC)染色體數(shù)目為2n=48,oligo-chr9探針信號(hào)有4個(gè),45SrDNA探針有4個(gè)且都沒有分布在chr9的端部位置;高桿野生稻(YS7035,CCDD)染色體2n=48條,oligo-chr9探針信號(hào)共有4個(gè)且信號(hào)基本覆蓋整條染色體。45SrDNA探針信號(hào)共有8個(gè),有4個(gè)信號(hào)分布于染色體的端部位置,其中有3個(gè)是分布于chr9上,1個(gè)信號(hào)是分布于非chr9上,另外的4個(gè)45S rDNA信號(hào)是分布于染色近著絲粒區(qū);寬葉野生稻(YS7036,CCDD)染色體數(shù)為2n=48條,oligo-chr9探針信號(hào)共有4個(gè),基本上覆蓋了整條染色體,其中有2個(gè)信號(hào)較弱,45S rDNA探針信號(hào)共有14個(gè),其中有6個(gè)信號(hào)分布于染色體近著絲粒區(qū),有8個(gè)信號(hào)分布于染色體的端部,其中的4個(gè)信號(hào)分布于chr9染色體端部。另一個(gè)不同來源的寬葉野生稻(YS7037,CCDD)的oligo-chr9探針信號(hào)共4個(gè),45S rDNA探針信號(hào)共8個(gè),與YS7036存在差異。短花藥野生稻(YS7040,FF)染色體數(shù)目2n=24條,oligo-chr9探針信號(hào)共2個(gè),45SrDNA探針信號(hào)共2個(gè),分布于chr9端部且信號(hào)較強(qiáng)。長護(hù)穎野生稻(YS7039,HHJJ)染色體數(shù)為2n=48條,oligo-chr9探針信號(hào)共4個(gè),45S rDNA探針信號(hào)共8個(gè),有2個(gè)信號(hào)分布于染色體近著絲粒區(qū),2個(gè)信號(hào)分布于非chr9的端部,4個(gè)信號(hào)則分布于chr9端部。馬來野生稻(YS7042,HHJJ)染色數(shù)為2n=48條,oligo-chr9探針信號(hào)共有4個(gè),45SrDNA探針信號(hào)共有4個(gè),都分布于chr9端部。2、本研究發(fā)現(xiàn)CC組根莖野生稻(YS7027)有2個(gè)oligo-chr9探針信號(hào),45SrDNA信號(hào)有2個(gè),其中1個(gè)信號(hào)分布于chr9端部,另1個(gè)則分布于非chr9端部。不同來源的緊穗野生稻與藥用野生稻在45S rDNA和oligo-chr9探針信號(hào)上也存在著差異,我們對不同來源的緊穗野生稻和藥用野生稻進(jìn)行了基于oligo-chr9與45S rDNA探針FISH圖像的染色體核型分析。研究結(jié)果顯示緊穗野生稻(YS7024、YS7025、YS7026)在45S rDNA探針信號(hào)具有多態(tài)性,YS7024、YS7025和YS7026分別有5個(gè)、3個(gè)和2個(gè)信號(hào),而且YS7026的一條chr9上沒有45SrDNA信號(hào)分布;不同來源的藥用野生稻(YS7029、YS7030、YS7032)在45S rDNA和oligo-chr9信號(hào)均存在差異,YS7030有4個(gè)oligo-chr9信號(hào),其中的2個(gè)oligo-chr9信號(hào)分布于非chr9端部,2個(gè)oligo-chr9信號(hào)分布于第1對染色體的短臂的端部,而 YS7029 和 YS7032 只有 2 個(gè) oligo-chr9 信號(hào);在 YS7029 和 YS7030 均有 4 個(gè) 45S rDNA信號(hào)分布于染色體端部,而在YS7032中有一對45S rDNA信號(hào)分布于染色體近著絲粒區(qū)。3、本研究根據(jù)已公布的藥用野生稻著絲粒區(qū)域的信息,設(shè)計(jì)5對引物,對緊穗野生稻、根莖野生稻、藥用野生稻進(jìn)行PCR擴(kuò)增,以栽培稻02428作為對照,選擇CC組野生稻中均有特異清晰目標(biāo)條帶的擴(kuò)增產(chǎn)物并回收,重組到克隆載體后擴(kuò)繁提取質(zhì)粒,用缺口平移法標(biāo)記質(zhì)粒,獲得CC組野生稻著絲粒的探針,即CentO-C。在緊穗野生稻、藥用野生稻和根莖野生稻上進(jìn)行FISH,結(jié)果顯示每個(gè)細(xì)胞共有20個(gè)CentO-C信號(hào),有2對染色體沒有信號(hào)分布。結(jié)果表明CentO-C適用于CC組野生稻染色體的鑒定,為今后CC組野生稻與栽培稻雜交后代的檢測提供了有用的工具。4、本研究在NCBI網(wǎng)站數(shù)據(jù)庫查找到覆蓋整個(gè)基因組的1200對SSR分子標(biāo)記,并通過PCR篩選出緊穗野生稻與栽培稻02428的352對SSR多態(tài)分子標(biāo)記,平均每條染色體含有29對分子標(biāo)記并將其繪制成分子標(biāo)記圖譜。
【圖文】：

揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文０．５ｍＭ邋ｄＮＴＰ邐１０ｕｌ逡逑０．５ｍＭ邋ｄｉｇ－ｄＵＴＰ邐ｌＯｕｌ逡逑ＤＮＡ邋ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ邐２＿４ｕｌ逡逑ＤＮａｓｅ邋Ｉ邐４ｕｌ逡逑ｄｄＨ２0邐補(bǔ)足至邋ｌＯＯｕｌｍｉｎ，，然后加入１０ｕｌ０．２ＭＥＤＴＡ以終止片段ｌＯＯｂｐ左右大小。逡逑

圖２．１單鏈寡核苷酸探針的制備逡逑２．２．４．１邋乳化邋ＰＣＲ逡逑
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S511.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2650839