Latrophilin(LPH)屬于G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)家族中一個獨(dú)特的分支,并且被稱之為粘附性的GPCR,其首次鑒定作為黑寡婦蜘蛛毒液中有效成分神經(jīng)毒素(α-latrotoxin,a-LTX)的潛在靶標(biāo)。作為一種經(jīng)典的GPCR,LPH在不同生物(人、小鼠和果蠅)體內(nèi)參與調(diào)控多動癥、躁郁癥以及精神分裂癥等多種精神疾病的發(fā)生。我們實(shí)驗(yàn)室最近研究顯示在赤擬谷盜中通過RNAi技術(shù)對Tclph基因進(jìn)行干擾不僅導(dǎo)致了部分幼蟲形態(tài)缺陷,并且伴隨生殖能力顯著降低,這與其他小組的研究結(jié)果相一致。有趣地是,我們還首次發(fā)現(xiàn)在赤擬谷盜幼蟲階段敲減Tclph增加了其對抗膽堿殺蟲劑(敵敵畏和克百威)的敏感性,暗示Tclph參與了殺蟲劑的抵抗過程。然而,關(guān)于Tclph的下游分子調(diào)節(jié)機(jī)制目前還不清楚。因此,我們進(jìn)一步利用轉(zhuǎn)錄組測序(RNA-seq)技術(shù)篩選Tclph下游抗性相關(guān)基因以闡明其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,并且在赤擬谷盜體內(nèi)對這些相關(guān)基因進(jìn)行了功能分析并得到了以下結(jié)果。首先,RNA-seq結(jié)果顯示在赤擬谷盜中干擾Tclph分別導(dǎo)致了兩個殺蟲劑轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因(TcCSP7、TcOBPC01)以及兩個殺蟲劑代謝相關(guān)基因...

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮寫詞簡表
第1章 緒論
    1.1 蛛毒素受體Latrophilin研究現(xiàn)狀
        1.1.1 Latrophilin的鑒定、分類以及結(jié)構(gòu)分析
        1.1.2 Latrophilin的功能研究
    1.2 昆蟲殺蟲劑抗性代謝的研究進(jìn)展
        1.2.1 殺蟲劑抗藥性及其抗性機(jī)制的研究
        1.2.2 昆蟲OBPs和CSPs的研究進(jìn)展
        1.2.3 昆蟲CYP450s的研究進(jìn)展
    1.3 模式生物-赤擬谷盜簡介
    1.4 本研究的目的及意義
第2章 赤擬谷盜Latrophilin下游抗性基因的篩選及其調(diào)控關(guān)系
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)儀器、材料和試劑
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 緩沖液的配制
        2.3.2 Tclph的雙鏈RNA(double-strand RNA,dsRNA)的合成
        2.3.3 Tclph的dsRNA的注射
        2.3.4 總RNA抽提
        2.3.5 cDNA的合成
        2.3.6 qRT-PCR檢測基因表達(dá)水平
        2.3.7 殺蟲劑處理實(shí)驗(yàn)
        2.3.8 數(shù)據(jù)處理
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 干擾Tclph影響殺蟲劑轉(zhuǎn)運(yùn)以及殺蟲劑代謝相關(guān)基因的表達(dá)
        2.4.2 Tclph通過平衡調(diào)控TcCSP7和TcOBPC01的表達(dá)參與殺蟲劑抗性
        2.4.3 Tclph通過調(diào)控TcCYP4BN1和TcCYP6BQ11的表達(dá)參與殺蟲劑抗性
    2.5 討論
第3章 赤擬谷盜Latrophilin下游抗性基因的功能分析
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料、儀器及試劑
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 總RNA抽提
        3.3.2 cDNA的合成
        3.3.3 各個基因不同發(fā)育時期、組織表達(dá)模式分析
        3.3.4 殺蟲劑誘導(dǎo)分析
        3.3.5 RNAi分析
        3.3.6 殺蟲劑敏感性檢測
        3.3.7 數(shù)據(jù)處理
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 TcCSP7、TcOBPC01、TcCYP4BN1和TcCYP6BQ11的時期表達(dá)模式分析
        3.4.2 TcCSP7、TcOBPC01、TcCYP4BN1和TcCYP6BQ11的組織表達(dá)模式分析
        3.4.3 殺蟲劑對TcCSP7、TcOBPC01、TcCYP4BN1和TcCYP6BQ11的誘導(dǎo)模式分析
        3.4.4 干擾TcCSP7、TcOBPC01、TcCYP4BN1和TcCYP6BQ11干擾效率最大時間點(diǎn)的探索
        3.4.5 干擾TcCSP7、TcOBPC01、TcCYP4BN1和TcCYP6BQ11對殺蟲劑抗性的影響
    3.5 討論
第4章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及研究成果
致謝



本文編號：3922185