赤擬谷盜(Tribolium castaneum)屬于鞘翅目(Coleoptera)擬步甲科(Tenebrionidae)擬谷盜屬(Tribolium),是一種危害嚴(yán)重的世界性農(nóng)業(yè)糧食害蟲,也是所有昆蟲中系統(tǒng)性RNA干擾最有效的昆蟲。魚尼丁受體(Ryanodine Receptor, RyRs)和1,4,5-三磷酸肌醇受體(Inositol1,4,5-Trisphosphate Receptor, IP3Rs)均是控制Ca2+從胞內(nèi)鈣庫釋放的四聚體鈣離子通道。魚尼丁受體是新型殺蟲劑氟蟲酰胺和氯蟲酰胺的作用靶標(biāo),1,4,5-三磷酸肌醇受體是開發(fā)新型高選擇性殺蟲劑的重要潛在靶標(biāo),但目前國內(nèi)外有關(guān)昆蟲魚尼丁受體和1,4,5-三磷酸肌醇受體這兩種細(xì)胞內(nèi)鈣離子通道基因結(jié)構(gòu)與功能的研究還相對滯后,并且對其在昆蟲生長發(fā)育過程中的作用尚無報(bào)道。本文克隆了赤擬谷盜魚尼丁受體和1,4,5-三磷酸肌醇受體基因,分析了二者在赤擬谷盜不同發(fā)育階段的表達(dá)模式,并在此基礎(chǔ)上利用RNA干擾技術(shù)對其功能進(jìn)行了研究。研究結(jié)果對進(jìn)一步提高對昆蟲細(xì)胞內(nèi)鈣離子通道結(jié)構(gòu)和功能關(guān)系的認(rèn)識以及新型高效殺蟲劑的創(chuàng)制具有重要的理論意義和...

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 昆蟲細(xì)胞內(nèi)鈣離子通道研究進(jìn)展
        1.1 細(xì)胞內(nèi)鈣離子通道
        1.2 魚尼丁受體和1,4,5-三磷酸肌醇受體
        1.3 RyR和IP₃R的結(jié)構(gòu)
        1.4 昆蟲RyR和IP₃R
        1.5 作用于昆蟲RyR的新型殺蟲劑
    2 昆蟲RNA干擾研究進(jìn)展
        2.1 RNAi的機(jī)制
        2.2 昆蟲dsRNA的導(dǎo)入方法和攝取機(jī)制
            2.2.1 昆蟲dsRNA的導(dǎo)入方法
            2.2.2 昆蟲dsRNA的攝取機(jī)制
        2.3 影響昆蟲RNAi效應(yīng)的因素
        2.4 RNAi技術(shù)在昆蟲中的應(yīng)用
            2.4.1 基因功能研究
            2.4.2 害蟲控制研究
            2.4.3 抗藥性研究
    3 本文研究目的和意義
第二章 赤擬谷盜兩種細(xì)胞內(nèi)鈣離子通道基因的克隆與序列分析
    1 材料與方法
        1.1 供試蟲源
        1.2 主要試劑和儀器
            1.2.1 主要試劑
            1.2.2 主要儀器
        1.3 試驗(yàn)方法
            1.3.1 總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
                1.3.1.1 總RNA提取
                1.3.1.2 cDNA模板的合成
            1.3.2 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)
            1.3.3 感受態(tài)細(xì)胞制備
            1.3.4 連接反應(yīng)
            1.3.5 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
            1.3.6 α互補(bǔ)法進(jìn)行重組質(zhì)粒的篩選
            1.3.7 PCR產(chǎn)物克隆
            1.3.8 序列分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 赤擬谷盜魚尼丁受體基因(TcRyR)全長cDNA序列克隆
        2.2 赤擬谷盜1,4,5-三磷酸肌醇受體基因(TcIP₃R)全長cDNA序列克隆
        2.3 TcRyR和TcIP₃R結(jié)構(gòu)域預(yù)測
        2.4 TcRyR C末端和N末端分析
        2.5 TcRyR和TcIP₃R基因組結(jié)構(gòu)分析
        2.6 選擇性剪接外顯子的確認(rèn)
    3 討論
第三章 赤擬谷盜兩種細(xì)胞內(nèi)鈣離子通道基因mRNA的表達(dá)分析
    1 材料與方法
        1.1 供試蟲源
        1.2 主要試劑和儀器
        1.3 試驗(yàn)方法
            1.3.1 RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
                1.3.1.1 總RNA提取
                1.3.1.2 熒光定量PCR所用cDNA模板合成
        1.4 熒光定量PCR
    2 結(jié)果與分析
        2.1 魚尼丁受體基因在赤擬谷盜不同發(fā)育階段的表達(dá)分析
        2.2 1,4,5-三磷酸肌醇受體基因在赤擬谷盜不同發(fā)育階段的表達(dá)分析
    3 討論
第四章 赤擬谷盜兩種細(xì)胞內(nèi)鈣離子通道基因RNAi沉默研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料、儀器與試劑
        1.1 試蟲
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 雙鏈RNA(dsRNA)合成
            2.1.1 dsDNA合成
            2.1.2 PCR產(chǎn)物回收
            2.1.3 轉(zhuǎn)錄
            2.1.4 純化dsRNA
        2.2 dsRNA注射
            2.2.1 500×injection buffer的配置
            2.2.2 dsRNA的注射
        2.3 數(shù)據(jù)處理
    3 結(jié)果與分析
        3.1 RNA干擾效率分析
        3.2 RNA干擾表型分析
    4 討論
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號：3880785