赭曲霉毒素(Ochratoxin)是由青霉菌屬(Penicillium)和曲霉菌屬的霉菌產(chǎn)生的有毒的次級代謝產(chǎn)物,在全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅著農(nóng)產(chǎn)品的安全。其中赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)因毒性最大、農(nóng)作物污染程度最深、分布最廣、與人類健康關(guān)系最密切而廣為人知。傳統(tǒng)的檢測手段,如基于儀器建立的高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)、液相質(zhì)譜聯(lián)用法(Liquid Chromatography-electrospray Mass Spectrometry,LC-MS)因存在儀器成本高、操作流程繁瑣、需專業(yè)受訓(xùn)人員等而限制其推廣應(yīng)用。傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附測定法(Enzyme–linked Immunosorbent Assay,ELISA)是經(jīng)典的檢測方法,具有操作簡便,成本低廉,能滿足高通量篩查的優(yōu)點(diǎn),但也因檢測靈敏度低,無法實(shí)現(xiàn)對痕量物質(zhì)定量檢測;且其顯色物質(zhì)四甲基聯(lián)苯胺(tetramethylbenzidine,TMB),因其顯色單一,裸眼辨識度差,無法實(shí)現(xiàn)定性檢測。因此,能實(shí)現(xiàn)高靈敏和裸眼判讀的新型ELIS...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略語表
第一章 前言
    1.1 赭曲霉毒素的研究進(jìn)展
        1.1.1 赭曲霉毒素的來源及毒性
        1.1.2 赭曲霉毒素A的理化性質(zhì)
        1.1.3 赭曲霉毒素A臨床癥狀及機(jī)理
        1.1.4 OTA的衛(wèi)生限量標(biāo)準(zhǔn)
        1.1.5 OTA的檢測方法
            1.1.5.1 高效液相色譜法
            1.1.5.2 薄層色譜法
            1.1.5.3 膠體金免疫層析技術(shù)
            1.1.5.4 酶聯(lián)免疫吸附測定法
    1.2 脲酶理化性質(zhì)概述
    1.3 基于脲酶介導(dǎo)的pH響應(yīng)ELISA的概述
        1.3.1 pH響應(yīng)ELISA技術(shù)原理
        1.3.2 pH響應(yīng)ELISA技術(shù)特點(diǎn)及應(yīng)用
    1.4 基于脲酶介導(dǎo)的等離子共振ELISA(p–ELISA)的概述
        1.4.1 表面等離子共振
        1.4.2 常見調(diào)控的金納米粒子SPR的方法
            1.4.2.1 生長法
            1.4.2.2 聚集法
            1.4.2.3 刻蝕法
            1.4.2.4 金屬化法
        1.4.3 pELISA檢測方法的特點(diǎn)和應(yīng)用
第二章 基于脲酶介導(dǎo)pH響應(yīng)ELISA的建立及應(yīng)用
    2.1 前言
    2.2 材料與儀器
        2.2.1 試劑及材料
        2.2.2 儀器設(shè)備
        2.2.3 試劑的配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 pH響應(yīng)ELISA可行性實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證
        2.3.2 Urease與OTA偶聯(lián)物的合成、表征及BCP的配制
            2.3.2.1 赭曲霉毒素人工抗原合成
            2.3.2.2 溴甲酚紫顯色液的配制
        2.3.3 pH響應(yīng)ELISA的操作步驟
        2.3.4 pH響應(yīng)ELISA實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化
            2.3.4.1 棋盤法優(yōu)化酶標(biāo)抗原和抗體的用量
            2.3.4.2 免疫學(xué)反應(yīng)中pH值的優(yōu)化
            2.3.4.3 免疫學(xué)反應(yīng)甲醇濃度的優(yōu)化
            2.3.4.4 底物濃度的優(yōu)化
            2.3.4.5 底物反應(yīng)溫度的優(yōu)化
            2.3.4.6 酶催化反應(yīng)時間的優(yōu)化
        2.3.5 pH響應(yīng)ELISA檢測性能分析
            2.3.5.1 實(shí)驗(yàn)的靈敏度和特異性的評價
            2.3.5.2 與傳統(tǒng)的HRP-ELISA方法學(xué)的比較
            2.3.5.3 pH響應(yīng)ELISA實(shí)際樣本檢測性能評價
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 概念驗(yàn)證
        2.4.2 Urease與OTA偶聯(lián)物的表征
        2.4.3 優(yōu)化pH響應(yīng)ELISA參數(shù)
            2.4.3.1 棋盤法優(yōu)化抗原、抗體的用量
            2.4.3.2 優(yōu)化影響免疫學(xué)反應(yīng)的其他條件
        2.4.4 pH響應(yīng)ELISA檢測性能分析
            2.4.4.1 實(shí)驗(yàn)的靈敏度和特異性評價
            2.4.4.2 與傳統(tǒng)的HRP-ELISA方法學(xué)的比較
            2.4.4.3 pH響應(yīng)ELISA準(zhǔn)確度與精密度評價
    2.5 本章小結(jié)
第三章 基于脲酶介導(dǎo)pELISA的建立及應(yīng)用
    3.1 前言
    3.2 材料與儀器
        3.2.1 試劑及材料
        3.2.2 儀器設(shè)備
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 pELISA可行性驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)
        3.3.2 OTA與Urease偶聯(lián)物的制備及表征
        3.3.3 金納米花的合成及表征
        3.3.4 pELISA的操作步驟
        3.3.5 實(shí)驗(yàn)相關(guān)參數(shù)的優(yōu)化
            3.3.5.1 棋盤法優(yōu)化酶標(biāo)抗原和抗體的用量
            3.3.5.2 免疫學(xué)反應(yīng)其他條件的優(yōu)化
        3.3.6 pELISA檢測性能分析
            3.3.6.1 實(shí)驗(yàn)的靈敏度的評價
            3.3.6.2 與傳統(tǒng)的HRP-ELISA方法學(xué)的比較
            3.3.6.3 實(shí)驗(yàn)特異性評價
            3.3.6.4 pELISA實(shí)際樣本檢測性能評價
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 實(shí)驗(yàn)可行性驗(yàn)證
        3.4.2 Urease@OTA偶聯(lián)物的制備及表征
        3.4.3 pELISA中各參數(shù)的優(yōu)化
            3.4.3.1 棋盤法優(yōu)化酶標(biāo)抗原、抗體的用量
            3.4.3.2 免疫學(xué)反應(yīng)其他條件的優(yōu)化
        3.4.4 pELISA檢測性能分析
            3.4.4.1 常規(guī)HRP-ELISA與pELISA的靈敏度評價
            3.4.4.2 pELISA的特異性評價
            3.4.4.3 pELISA實(shí)際樣本檢測性能評價
    3.5 本章小結(jié)
第四章 結(jié)論與展望
    4.1 結(jié)論
        4.1.1 pH響應(yīng)ELISA的建立以及應(yīng)用
        4.1.2 pELISA的建立以及應(yīng)用
    4.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄1 試劑材料
附錄2 儀器設(shè)備
個人介紹
攻讀學(xué)位期間的研究成果
彩圖



本文編號：3837098