發(fā)布時(shí)間：2022-07-07 09:03

　　儲(chǔ)糧危害真菌可造成糧食在儲(chǔ)藏過程中的霉變甚至產(chǎn)生有毒代謝產(chǎn)物。當(dāng)條件適宜時(shí),以灰綠曲霉為主的干生性霉菌會(huì)在糧堆內(nèi)開始生長(zhǎng),灰綠曲霉的生長(zhǎng)代謝會(huì)進(jìn)一步為其它霉菌如黃曲霉的生長(zhǎng)創(chuàng)造出有利的條件。黃曲霉是糧食儲(chǔ)藏過程中的主要危害真菌,其生長(zhǎng)代謝會(huì)產(chǎn)生具有致癌致突變能力的黃曲霉毒素,黃曲霉毒素主要有B1、B2、G1、G2四種類型,一般在食品和糧食儲(chǔ)藏中出現(xiàn)的都是黃曲霉毒素B1。本課題研究在提取了揚(yáng)15小麥的全基因組后,用PCR技術(shù)對(duì)其屬于病程相關(guān)蛋白第四家族（PR4）的wheatwin1基因進(jìn)行了擴(kuò)增并獲得了長(zhǎng)度為378bp的成熟編碼序列。將wheatwin1基因與質(zhì)粒pGEX4T-3分別用NotI酶和EcoRI酶進(jìn)行雙酶切并用T4DNA連接酶連接后轉(zhuǎn)入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞DH5α中進(jìn)行克隆,獲得了重組質(zhì)粒T3-W1,然后將T3-W1轉(zhuǎn)入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞Origami B中進(jìn)行表達(dá)并得到了以包涵體蛋白形式存在的融合蛋白GST-W1。將包涵體蛋白復(fù)性后用谷胱甘肽瓊脂糖4B凝膠對(duì)GST-W1進(jìn)行純化,繼續(xù)用Thrombin酶切后獲得了wheatwin1。對(duì)wheatwin1的生物活性研究表明其具有... 

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 前言
    1.1 小麥儲(chǔ)藏方法
        1.1.1 高溫密閉法
        1.1.2 低溫密閉法
        1.1.3 缺氧貯藏法
        1.1.4 化學(xué)藥劑法
        1.1.5 臭氧法
        1.1.6 電子束照射法
    1.2 小麥儲(chǔ)藏中的真菌污染
    1.3 黃曲霉的危害
    1.4 黃曲霉毒素的危害
    1.5 黃曲霉毒素的防治
    1.6 病程相關(guān)蛋白
    1.7 wheatwin1的介紹
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 小麥品種、菌種和質(zhì)粒
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)中的主要儀器設(shè)備
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)中的主要試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 Wheatwin1基因的獲得
        2.2.2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.3 T3-W1的表達(dá)
        2.2.4 復(fù)性純化與酶活分析
        2.2.5 W1對(duì)黃曲霉生長(zhǎng)及產(chǎn)毒的影響
3 結(jié)果與討論
    3.1 Wheatwin1基因的獲得
        3.1.1 小麥基因組DNA的提取
        3.1.2 Wheatwin1基因的PCR擴(kuò)增與回收
        3.1.3 討論
    3.2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    3.3 T3-W1的表達(dá)
        3.3.1 T3-W1的表達(dá)
        3.3.2 討論
    3.4 復(fù)性純化與酶活分析
        3.4.1 GST-W1的復(fù)性與W1的純化
        3.4.2 W1的RNA降解活性分析
        3.4.3 討論
    3.5 W1對(duì)黃曲霉生長(zhǎng)及產(chǎn)毒的影響
        3.5.1 W1對(duì)黃曲霉孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)的影響
        3.5.2 W1的熒光定位
        3.5.3 W1對(duì)黃曲霉產(chǎn)毒的影響
        3.5.4 W1對(duì)黃曲霉產(chǎn)毒關(guān)鍵基因的影響
        3.5.5 討論
4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[3]2個(gè)小麥PR蛋白基因的抗葉銹病相關(guān)性分析[D]. 高琳.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014



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