近幾年來新能源的開發(fā)一直是社會及科研學(xué)者們面臨的主要問題之一,化石能源的日漸枯竭使得新能源的開發(fā)迫在眉睫。纖維素是地球上數(shù)量豐富的可再生資源之一,分解纖維素生成乙醇等生物能源也已在工業(yè)上得到應(yīng)用。但目前能實際應(yīng)用的酶數(shù)量少且酶學(xué)特性優(yōu)異的酶不多,尋找并獲得具有高穩(wěn)定性、耐高溫且活力高的新型降解纖維素的酶類具有重要的應(yīng)用價值。而β-葡萄糖苷酶作為纖維素水解過程中最后一步,作用于寡糖鏈催化生成葡萄糖,是纖維素水解的限速步驟,β-葡萄糖苷酶目前已經(jīng)被應(yīng)用在食品、工業(yè)、醫(yī)藥以及農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域,其各方面的性能使其成為工業(yè)應(yīng)用的潛力酶。依靠傳統(tǒng)實驗室培養(yǎng)方法,β-葡萄糖苷酶基因是通過篩選微生物純培養(yǎng)菌株來獲得,這種方法有其優(yōu)勢,但弊端也愈發(fā)明顯。而生物信息學(xué)技術(shù)的興起,利用基因組挖掘技術(shù)等,使得很多新型的功能基因酶呈爆發(fā)式的被挖掘出來。宏基因組學(xué)概念的普及,意味著基因組學(xué)的研究已開拓出新的領(lǐng)域。宏基因組即某一環(huán)境中的微生物菌落的所有基因組的組合。這里面包含了大量的不可培養(yǎng)微生物的遺傳資源,為發(fā)現(xiàn)具有獨特性質(zhì)的新型功能酶類打開了 一個新的窗口。利用功能驅(qū)動的篩選方法可以高效、直觀的篩選宏基因組文庫中的功... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

一lp一葡萄糖昔酶活性克隆篩選

于搪基水解酶第三家族（ＧＨＦ３）的。進而利用生物信息學(xué)Ｉ：具軟件，從數(shù)據(jù)庫ＮＣＢＩ??中搜索Ｐ－葡萄糖苷酶家族蛋白序列，利用ＭＥＧＡ５．１軟件將ＪＷ５Ｇ３的蛋白序列與發(fā)現(xiàn)??了的其他Ｐ－葡萄糖苷酶家族蛋白序列一起構(gòu)迚進化樹（圖２－３），從進化樹結(jié)果得知，??｝Ｗ５ＧＪ確實屬于第三家族，通過比對分析，ｙＡＷＧＪ存在一個Ｆｎ３－ｌｉｋｅ模塊，這是發(fā)??現(xiàn)的糖苷水解酶第三家族的酶結(jié)構(gòu)中所具有的（圖２－４）。同時利用ＣｌｕＳｔａｌＸ２軟件對??這些序列進行多序列比對，發(fā)現(xiàn)含有糖基水解酶第三家族典型的ＳＤＷ保＇、？氣??基酸序列，有保守活性位點Ａｓｐ殘基（圖２－５）。??１７??

圖２－５?ｒ＿ＧＪ的多序列比對，其中星號為保守區(qū)域??Ｆｉｇ．?２－５?Ｍｕｌｔｉｐｌｅ－ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ?ｏｆ?ｏｆ?ＹＮＢＧ３，?Ｒｅｇｉｏｎｓ?ｏｆ?ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ?ｄｏｍａｉｎｓ?ａｒｅ?ｓｈｏｗｎ?ａｓ?ａｓｔｅｒｉｓｋｓ??１８??

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3230197