我國(guó)作為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)大國(guó),每年需消耗大量的工業(yè)氮肥,工業(yè)氮肥的使用會(huì)造成農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)下降、土壤板結(jié)、水體富營(yíng)養(yǎng)化、生產(chǎn)成本增加等一系列問(wèn)題,而微生物復(fù)合肥料能解決這些問(wèn)題,所以,選育高效率的微生物固氮菌株對(duì)發(fā)展可持續(xù)綠色農(nóng)業(yè)具有重要的意義。為了得到高效固氮菌,在吉首鉀長(zhǎng)石礦區(qū)采集土壤樣品,采用純培養(yǎng)方法從中分離、篩選得到具有較強(qiáng)固氮能力的細(xì)菌28株。對(duì)28株細(xì)菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,生理生化鑒定,以及采用分子生物學(xué)手段進(jìn)行16S r RNA序列分析,發(fā)現(xiàn)28株細(xì)菌別屬于8個(gè)科,10個(gè)屬,其中11株菌為根瘤菌屬,6株菌為芽胞桿菌屬,表明從鉀長(zhǎng)石礦區(qū)土壤中分離獲得的固氮菌具有較好的多樣性,根瘤菌為優(yōu)勢(shì)種群。分別從每個(gè)屬中選取生長(zhǎng)狀況較好的菌株作為代表菌株,通過(guò)發(fā)酵和凱氏定氮法測(cè)定,發(fā)現(xiàn)各屬代表菌株的固氮能力存在較大差異,根瘤菌和芽孢桿菌屬代表菌株的固氮能力最強(qiáng),其中根瘤菌代表菌株L13的96h發(fā)酵液氮含量達(dá)到10.71 mg/L,其次是芽孢桿菌代表菌株L10。為了能夠更好的了解和掌握菌株L13和L10的生長(zhǎng)特性,對(duì)菌株L13和L10生長(zhǎng)的溫度、p H、滲透壓、不同碳源等因子對(duì)固氮能力的影響進(jìn)行了比較。... 

【文章來(lái)源】：吉首大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：46 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

各固氮菌發(fā)酵液中氮含量

2.3.3 固氮細(xì)菌的 16S rRNA 基于片段的 PCR 擴(kuò)增瓊脂糖電泳結(jié)果用16S rRNA基因的特異性引物從細(xì)菌基因組DNA中成功的擴(kuò)增出大小約為1.6 kb的DNA片段，和預(yù)期的DNA片段大小一致。（如圖2.2）圖 2.2 細(xì)菌 16S rRNA 基因片段的 PCR 擴(kuò)增Fig.2.2 PCR amplification of 16S rRNA gene fragments from bacterial strains2.3.4 固氮細(xì)菌的系統(tǒng)發(fā)育分析對(duì)28株固氮細(xì)菌的16S rDNA進(jìn)行序列測(cè)定，將獲得的序列通過(guò)BLAST程序與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中已報(bào)發(fā)道的16S rDNA序列進(jìn)行相似性比對(duì)分析。結(jié)果表明，28株固氮細(xì)菌分別屬于腸桿菌科、假單胞菌科、伯克菌科、葉桿菌科、布魯菌科、根瘤菌科、芽胞桿菌科和類芽胞桿菌科8個(gè)科。分屬伯克霍爾德屬、腸桿菌屬、劍菌屬、芽胞桿菌屬、葉桿菌屬、Mitsuaria、假單胞屬、類芽胞桿菌屬、檸檬酸桿菌屬等共10個(gè)屬，表明鉀長(zhǎng)石礦區(qū)土壤中固氮菌種群具有多樣性。其中11株（39.28%）在系統(tǒng)發(fā)育上與根瘤菌屬（Rhizobium）關(guān)系密切，16S rDNA序列相似性高達(dá)98%~100%，為優(yōu)勢(shì)菌屬。其次6株為芽胞桿菌屬（Bacillus）。選取不同

3.3 結(jié)果與分析3.3.1 固氮細(xì)菌 L10 和 L13 的生長(zhǎng)曲線兩株固氮能力最高的L10、L13細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線（如圖3.1）圖 3.1 菌株 L10、L13 的生長(zhǎng)曲線Fig 3.1 Growht curve of strain L10 of L13由圖3.1可知，固氮菌株L10和L13的延滯期分別為0~12h和0~6h，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期分別為12~72h和6~54h，穩(wěn)定期分別為72~96h和54~96h。對(duì)比L10和L13我們可以發(fā)現(xiàn)兩者的生長(zhǎng)曲線存在差異，4個(gè)時(shí)期都不同，與L13相比，菌株L10的適應(yīng)期稍長(zhǎng)，而其對(duì)數(shù)期也較長(zhǎng)，但是平穩(wěn)期較短，較快的進(jìn)入了衰亡期。表明相同情況下

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]茶園土壤高活性固氮菌的篩選鑒定及接種效果初步研究[J]. 韓曉陽(yáng),李智,張麗霞,黃曉琴.  茶葉科學(xué). 2014(05)
[2]間作大豆對(duì)甘蔗根際土壤細(xì)菌及固氮菌多樣性的影響[J]. 彭東海,楊建波,李健,邢永秀,覃劉東,楊麗濤,李楊瑞.  植物生態(tài)學(xué)報(bào). 2014(09)
[3]不同農(nóng)作物根際自生固氮菌分離及固氮酶活性[J]. 李文鳳,房翠翠,霍英芝.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(07)
[4]四川核桃主產(chǎn)區(qū)根際土壤固氮細(xì)菌篩選及多樣性研究[J]. 李姝江,朱天輝,崔曉亮.  土壤通報(bào). 2014(01)
[5]重金屬污染對(duì)土壤酶活性的影響[J]. 費(fèi)楊,王曉麗.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(01)
[6]自生固氮菌活化土壤無(wú)機(jī)磷研究[J]. 張亮,楊宇虹,李倩,吳葉寬,黃建國(guó).  生態(tài)學(xué)報(bào). 2013(07)
[7]一株自生固氮細(xì)菌的分離和鑒定[J]. 吳翔,甘炳成,賈定洪,蔣元繼,唐杰,周潔.  西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2013(01)
[8]杉木根際固氮菌篩選及其溶磷性與分泌IAA特性研究[J]. 周德明,李蓉.  四川師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2012(04)
[9]接種自生固氮菌對(duì)玉米根際土壤酶活性和細(xì)菌群落功能多樣性的影響[J]. 陳勝男,谷潔,付青霞,孫薇,錢勛,高華,秦清軍.  植物營(yíng)養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào). 2012(02)
[10]圓褐固氮菌、巨大芽孢桿菌復(fù)合菌肥的制作及應(yīng)用效果[J]. 姜明.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2010(28)

博士論文
[1]微生物肥料及其微生態(tài)效應(yīng)研究[D]. 郭春景.東北林業(yè)大學(xué) 2004

碩士論文
[1]水稻根際促生菌的分離鑒定及其對(duì)水稻作用效果的研究[D]. 胡雪.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[2]微生物肥料作用機(jī)理的初步研究[D]. 劉健.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2000



本文編號(hào)：2938577