橢圓食粉螨隸屬粉螨科,是常見(jiàn)的儲(chǔ)糧害螨,對(duì)人類經(jīng)濟(jì)及健康產(chǎn)生嚴(yán)重危害。橢圓食粉螨的種群動(dòng)態(tài)受到溫度的影響很大,超過(guò)適宜的溫度范圍就會(huì)造成熱脅迫,熱脅迫則會(huì)誘導(dǎo)其體內(nèi)熱激蛋白的表達(dá)來(lái)應(yīng)對(duì)逆境。本文以橢圓食粉螨為材料,通過(guò)RT-PCR以及RACE技術(shù)克隆得到了橢圓食粉螨2個(gè)Hsp70基因cDNA的全長(zhǎng),并對(duì)其生物信息學(xué)進(jìn)行分析,通過(guò)熒光定量PCR(RT-qPCR)技術(shù)探究Hsp70 mRNA在不同螨態(tài)及熱脅迫下的表達(dá)水平,主要研究結(jié)論如下:1、克隆得到了橢圓食粉螨2條Hsp70的全長(zhǎng)分別命名為:AoHsp70-1和AoHsp70-2,其中AoHsp70-1基因GenBank登錄號(hào)為KX237517,cDNA的全長(zhǎng)為2307 bp,其中開(kāi)放閱讀框(ORF)為1974 bp,編碼657個(gè)氨基酸殘基,蛋白質(zhì)分子質(zhì)量為71.92 KDa,等電點(diǎn)pI為5.27,其氨基酸序列包含3個(gè)Hsp70家族的簽名序列,C-端存在GGXP 4肽重復(fù)序列,C-端末端存在胞質(zhì)標(biāo)志性基序EEVD,;AoHsp70-2基因GenBank登錄號(hào)為KX237518,cDNA的全長(zhǎng)為2623bp,其中ORF為1923 bp,編碼640個(gè)氨基酸殘基,蛋白質(zhì)分子質(zhì)量為70.64 KDa,等電點(diǎn)p I為5.56,其氨基酸序列包含3個(gè)Hsp70家族的簽名序列,C-端末端存在胞質(zhì)標(biāo)志性基序EEVD,AoHsp70-1和AoHsp70-2它們的氨基酸序列都缺失信號(hào)肽切割位點(diǎn),氨基酸序列中都含有6個(gè)N-糖基化位點(diǎn),氨基酸序列都存在多處疏水區(qū),預(yù)測(cè)的蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)包含N-端結(jié)構(gòu)域(NBD)和底物結(jié)合域(SBD)兩個(gè)結(jié)構(gòu)域。多重序列比對(duì)的結(jié)果顯示Hsp70具有高度的同源性,不同物種間氨基酸相似性在60%以上,通過(guò)NJ法構(gòu)建系統(tǒng)樹(shù),結(jié)果顯示AoHsp70-1和AoHsp70-2先聚為一支,然后再與其他螨類的Hsp70聚為一個(gè)大分支,其他所有昆蟲(chóng)的Hsp70聚為一個(gè)大分支。2、橢圓食粉螨在不同發(fā)育階段(卵、幼螨、若螨及雌成螨)下其Hsp70的表達(dá)水平不盡相同,其中AoHsp70-1在雌成螨中表達(dá)水平略高于其他螨態(tài),但是也沒(méi)有顯著性差異,而AoHsp70-2在若螨中表達(dá)水平最高,是對(duì)照組的5.01倍。低溫脅迫下AoHsp70-1的表達(dá)水平?jīng)]有顯著差異,而AoHsp70-2的表達(dá)水平隨著溫度的降低而明顯升高,并且在5℃時(shí)達(dá)到最大值為對(duì)照組的9.62倍,隨著溫度的進(jìn)一步降低AoHsp70-2表達(dá)水平開(kāi)始下降。高溫脅迫下AoHsp70-1在不同溫度下的表達(dá)水平?jīng)]有顯著性差異,而AoHsp70-2的表達(dá)水平隨著溫度的升高而明顯升高,并且在39℃時(shí)達(dá)到最大值為對(duì)照組的23.97倍,隨著溫度的進(jìn)一步降低其表達(dá)水平開(kāi)始下降。AoHsp70-1和AoHsp70-2對(duì)熱脅迫響應(yīng)的不同說(shuō)明:AoHsp70-1和AoHsp70-2分別是組成型和誘導(dǎo)型的Hsp70,說(shuō)明誘導(dǎo)型的AoHsp70-2在橢圓食粉螨抗熱脅迫中起到了關(guān)鍵性的作用,其在高溫脅迫時(shí)比低溫脅迫有更高的表達(dá)量,說(shuō)明橢圓食粉螨可能對(duì)高溫更加敏感。
【學(xué)位單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類】：S379.5;Q78
【部分圖文】：

圖 3-1 橢圓食粉螨總 RNA 提取情況電泳圖gure 3-1 Total RNA agarose gel electrophoresis of守序列的擴(kuò)增

橢圓食粉螨保守序列的擴(kuò)增Figure3-2ConservativesequenceagarosegelelectrophoresisofA.ovatus

3-3 橢圓食粉螨 Hsp70-1、Hsp70-2 基因 5'RACE 和 3'RACE 擴(kuò)增電泳圖（從左到右依 Hsp70-1 基因 5'RACE、Hsp70-2 基因 5'RACE、Hsp70-1 3'RACE、Hsp70-2 基因 3'RACFigure 3-3 Agarose gel electrophoresis of 5'RACE and 3'RACE amplification for AoHsp70and AoHsp70-2(From left to right are 5 terminal sequence of Hsp70-1、5 terminal sequence oHsp70-2、3 terminal sequence of Hsp70-1 and 3 terminal sequence of Hsp70-2)
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2864567