橢圓食粉螨隸屬粉螨科,是常見的儲糧害螨,對人類經(jīng)濟及健康產(chǎn)生嚴重危害。橢圓食粉螨的種群動態(tài)受到溫度的影響很大,超過適宜的溫度范圍就會造成熱脅迫,熱脅迫則會誘導其體內(nèi)熱激蛋白的表達來應(yīng)對逆境。本文以橢圓食粉螨為材料,通過RT-PCR以及RACE技術(shù)克隆得到了橢圓食粉螨2個Hsp70基因cDNA的全長,并對其生物信息學進行分析,通過熒光定量PCR(RT-qPCR)技術(shù)探究Hsp70 mRNA在不同螨態(tài)及熱脅迫下的表達水平,主要研究結(jié)論如下:1、克隆得到了橢圓食粉螨2條Hsp70的全長分別命名為:AoHsp70-1和AoHsp70-2,其中AoHsp70-1基因GenBank登錄號為KX237517,cDNA的全長為2307 bp,其中開放閱讀框(ORF)為1974 bp,編碼657個氨基酸殘基,蛋白質(zhì)分子質(zhì)量為71.92 KDa,等電點pI為5.27,其氨基酸序列包含3個Hsp70家族的簽名序列,C-端存在GGXP 4肽重復序列,C-端末端存在胞質(zhì)標志性基序EEVD,;AoHsp70-2基因GenBank登錄號為KX237518,cDNA的全長為2623bp,其中ORF為1923 bp,編碼640個氨基酸殘基,蛋白質(zhì)分子質(zhì)量為70.64 KDa,等電點p I為5.56,其氨基酸序列包含3個Hsp70家族的簽名序列,C-端末端存在胞質(zhì)標志性基序EEVD,AoHsp70-1和AoHsp70-2它們的氨基酸序列都缺失信號肽切割位點,氨基酸序列中都含有6個N-糖基化位點,氨基酸序列都存在多處疏水區(qū),預(yù)測的蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)包含N-端結(jié)構(gòu)域(NBD)和底物結(jié)合域(SBD)兩個結(jié)構(gòu)域。多重序列比對的結(jié)果顯示Hsp70具有高度的同源性,不同物種間氨基酸相似性在60%以上,通過NJ法構(gòu)建系統(tǒng)樹,結(jié)果顯示AoHsp70-1和AoHsp70-2先聚為一支,然后再與其他螨類的Hsp70聚為一個大分支,其他所有昆蟲的Hsp70聚為一個大分支。2、橢圓食粉螨在不同發(fā)育階段(卵、幼螨、若螨及雌成螨)下其Hsp70的表達水平不盡相同,其中AoHsp70-1在雌成螨中表達水平略高于其他螨態(tài),但是也沒有顯著性差異,而AoHsp70-2在若螨中表達水平最高,是對照組的5.01倍。低溫脅迫下AoHsp70-1的表達水平?jīng)]有顯著差異,而AoHsp70-2的表達水平隨著溫度的降低而明顯升高,并且在5℃時達到最大值為對照組的9.62倍,隨著溫度的進一步降低AoHsp70-2表達水平開始下降。高溫脅迫下AoHsp70-1在不同溫度下的表達水平?jīng)]有顯著性差異,而AoHsp70-2的表達水平隨著溫度的升高而明顯升高,并且在39℃時達到最大值為對照組的23.97倍,隨著溫度的進一步降低其表達水平開始下降。AoHsp70-1和AoHsp70-2對熱脅迫響應(yīng)的不同說明:AoHsp70-1和AoHsp70-2分別是組成型和誘導型的Hsp70,說明誘導型的AoHsp70-2在橢圓食粉螨抗熱脅迫中起到了關(guān)鍵性的作用,其在高溫脅迫時比低溫脅迫有更高的表達量,說明橢圓食粉螨可能對高溫更加敏感。
【學位單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2016
【中圖分類】：S379.5;Q78
【部分圖文】：

圖 3-1 橢圓食粉螨總 RNA 提取情況電泳圖gure 3-1 Total RNA agarose gel electrophoresis of守序列的擴增

橢圓食粉螨保守序列的擴增Figure3-2ConservativesequenceagarosegelelectrophoresisofA.ovatus

3-3 橢圓食粉螨 Hsp70-1、Hsp70-2 基因 5'RACE 和 3'RACE 擴增電泳圖（從左到右依 Hsp70-1 基因 5'RACE、Hsp70-2 基因 5'RACE、Hsp70-1 3'RACE、Hsp70-2 基因 3'RACFigure 3-3 Agarose gel electrophoresis of 5'RACE and 3'RACE amplification for AoHsp70and AoHsp70-2(From left to right are 5 terminal sequence of Hsp70-1、5 terminal sequence oHsp70-2、3 terminal sequence of Hsp70-1 and 3 terminal sequence of Hsp70-2)
【參考文獻】

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2 夏萬敏;胡帥;艾濤;羅榮華;夏紅;王莉;樊映紅;;成都地區(qū)1586例兒童過敏性疾病常見過敏原分析[J];四川醫(yī)學;2015年04期

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4 辛天蓉;龔舒;鄒志文;夏斌;;溫度對尼氏真綏螨捕食桔全爪螨功能反應(yīng)的影響[J];南昌大學學報(理科版);2013年05期

5 覃貴勇;李慶;;溫度對加州新小綏螨捕食作用影響及高溫耐饑餓能力研究[J];西南農(nóng)業(yè)學報;2013年03期

6 張宇;辛天蓉;鄒志文;宋樹賢;夏斌;;我國儲糧螨類研究概述[J];江西植保;2011年04期

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2 翟會芳;甜菜夜蛾熱激蛋白Hsp70和Hsp90基因克隆和表達[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2010年

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4 吳太葆;基于形態(tài)特征和COI基因的粉螨重要類群系統(tǒng)發(fā)育研究（蜱螨亞綱：粉螨亞目）[D];南昌大學;2007年

本文編號：2864567