葡萄園土壤中含有豐富的微生物群落結(jié)構(gòu),其在葡萄園生態(tài)系統(tǒng)中起著重要作用。本文分別以貴州銅仁葡萄園不同深度土壤(0-5cm、5-10 cm、10-20 cm、20-40 cm),貴州鎮(zhèn)遠(yuǎn)葡萄園非根際土壤、根際土壤、以及成熟的葡萄漿果為研究對象,結(jié)合運用聚合酶鏈?zhǔn)阶冃蕴荻饶z電泳(PCR-DGGE)、高通量測序技術(shù)(Illumina Hiseq sequencing)、熒光定量PCR(Q-PCR),研究葡萄園0-40 cm土層深度土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的垂直分布特征及非根際和根際微生物的群落特征。同時,結(jié)合平板分離、5.8S-ITS區(qū)PCR-RFLP分型及26S rDNA D1/D2區(qū)的序列分析方法對葡萄園土壤、葡萄漿果及葡萄自然發(fā)酵過程酵母菌多樣性進行了研究。結(jié)果表明:貴州銅仁地區(qū)葡萄園土壤有機質(zhì)含量和有效磷含量在各土層間差異顯著,土壤蔗糖酶、脲酶和磷酸酶隨土層深度的增加而顯著性地降低。熒光定量PCR結(jié)果表明:各土層土壤的細(xì)菌的拷貝數(shù)(9.10-10.03 Log copies g-1)與土壤水分、有機質(zhì)、總磷、淀粉酶呈現(xiàn)顯著的相關(guān)關(guān)系,并且0-5 cm土層的細(xì)菌基因拷貝數(shù)明顯高于20-40 cm土層細(xì)菌基因拷貝數(shù)。真菌18S rRNA基因的拷貝數(shù)處在5.97-6.91 Log copies g-1之間,且與土壤水分、有機質(zhì)、總N、蔗糖酶呈現(xiàn)顯著的相關(guān)關(guān)系。PCR-DGGE和Illumina HiSeq高通量測序分析均表明變形菌門(Proteobacteria)、酸桿菌門(Acidobacteria)、放線菌門(Actinobacteria)是優(yōu)勢細(xì)菌門,子囊菌門(Ascomycota)和擔(dān)子菌門(Basidiomycota)為優(yōu)勢真菌門;節(jié)桿菌屬(Arthrobacter)和假單胞菌屬(Pseudomonas)為優(yōu)勢細(xì)菌屬,被孢霉屬(Mortierella)和曲霉屬(Aspergillus)為優(yōu)勢真菌屬。相似性分析(Analysis of group similarities,ANOSIM)和多響應(yīng)置換過程(M ulti-response permutation procedures,MRPP)分析表明,0-5 cm土層土壤的細(xì)菌和真菌的群落結(jié)構(gòu)與10-20 cm及20-40 cm土層土壤群落結(jié)構(gòu)具有明顯差異。冗余分析(RDA分析)和皮爾遜相關(guān)性分析表明土壤理化性質(zhì)、土壤酶及土壤中的微生物群落結(jié)構(gòu)之間存在相關(guān)關(guān)系。貴州鎮(zhèn)遠(yuǎn)地區(qū)葡萄園根際土壤的含水量、有機質(zhì)、總N、總P和有效P均高于非根際土壤;根際土壤中的淀粉酶活性高于非根際土壤,而脲酶,過氧化氫酶,磷酸酶的活性均低于非根際土。熒光定量PCR分析表明:葡萄園根際土壤細(xì)菌16S rRNA基因的拷貝數(shù)和真菌18S rRNA基因的拷貝數(shù)均高于非根際土壤。PCR-DGGE和Illumina Hiseq高通量測序分析均表明,變形菌門(Proteobacteria)和放線菌門(Actinobacteria)為優(yōu)勢細(xì)菌類群,子囊菌門(Ascomycota)和擔(dān)子菌門(Basidiomycota)為優(yōu)勢真菌類群。α多樣性分析表明,根際土壤細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)低于非根際土壤,根際土壤真菌的群落結(jié)構(gòu)高于非根際土壤。β多樣性分析表明,與非根際土壤相比,葡萄根際土壤含有33個特有細(xì)菌屬和208個特有的真菌屬。采用YPD平板從葡萄園土壤、葡萄漿果及葡萄發(fā)酵過程共分離酵母257株,并利用WL培養(yǎng)基進行初步形態(tài)鑒定;其次,利用5.8S-ITS區(qū)PCR-RFLP分型的方法進行分類,結(jié)果區(qū)分為32類酶切圖譜類型。其中銅仁葡萄園土壤的酵母種類最為豐富,有14類;鎮(zhèn)遠(yuǎn)葡萄園土壤次之,有12類;葡萄漿果表面,有10類;而葡萄自然發(fā)酵過程只分離到4類;最后利用26S rDNA D1/D2區(qū)序列分析的方法將32種酵母菌進一步鑒定,分別屬于2個門,32個屬。總體上講,Wickerhamomyces pijper和Cyberlindnera saturnus為葡萄園土壤中最豐富的物種,Hanseniaspora lachance為葡萄漿果表面最豐富的物種,而葡萄自然發(fā)酵過程中,Hanseniaspora lachancei和Issatchenkia terricola為發(fā)酵前期優(yōu)勢酵母菌,Hanseniaspora lachancei,Issatchenkia terricola和Pichia occidentalis為發(fā)酵中期優(yōu)勢酵母菌,Pichia manshurica為發(fā)酵后期優(yōu)勢酵母菌。
【學(xué)位單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：S663.1;S154.3
【部分圖文】：

第一章 緒論1.4 本論文的研究內(nèi)容與技術(shù)路線1.4.1 研究內(nèi)容本論文研究內(nèi)容主要有：(1) 貴州銅仁葡萄種植基地不同土層深度上（0-5 cm，5-10 cm，10-20 cm，20-40 cm）土壤微生物多樣性研究；(2) 貴州鎮(zhèn)遠(yuǎn)葡萄種植基地 0-20 cm 深度的非根際和根際土壤微生物多樣性研究；(3) 貴州葡萄產(chǎn)區(qū)葡萄園土壤、葡萄漿果及葡萄自然發(fā)酵過程酵母菌多樣性研究。1.4.2 研究技術(shù)路線本論文的研究技術(shù)路線如圖 1-1 所示：

圖 2-1 不同土層深度土壤水分Figure 2-1 Soil moisture in different soil depths萄園不同土層深度土壤 pH 分析植株生長需要適宜的 pH，因此土壤 pH 值是表征土壤土壤質(zhì)量的重要以看出，該葡萄園 0 ~ 40 cm 土壤 4 個位點的 pH 在 7.86 ~ 8.14 之間土壤。但 pH 值在各位點上各土層中的變化幅度不明顯，相差不到 0.1葡萄園土壤 pH 在各位點各土層波動不大。

圖 2-1 不同土層深度土壤水分Figure 2-1 Soil moisture in different soil depths萄園不同土層深度土壤 pH 分析植株生長需要適宜的 pH，因此土壤 pH 值是表征土壤土壤質(zhì)量的重要以看出，該葡萄園 0 ~ 40 cm 土壤 4 個位點的 pH 在 7.86 ~ 8.14 之間土壤。但 pH 值在各位點上各土層中的變化幅度不明顯，相差不到 0.1葡萄園土壤 pH 在各位點各土層波動不大。
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本文編號：2859640