我國松樹種類繁多，且松針資源非常豐富，松針葉是一種可持續(xù)利用的天然再生資源。合理利用廢棄松針資源，將松針資源用作土壤改良劑，合理科學(xué)地改善土壤退化，同時提高土壤生物多樣性，因此松針資源的開發(fā)與利用對土壤的生態(tài)環(huán)境改善起著尤為重要的作用。 以大興安嶺松林區(qū)的腐殖土樣為菌源，以松針粉末為唯一碳源的特異性培養(yǎng)基從自然樣品中篩選特異性的菌株，以其CMCase酶活為選育指標(biāo)，分離和純化獲得5株產(chǎn)纖維素酶活力較高的細(xì)菌。為進一步研究松針液體固體發(fā)酵提供理論依據(jù)及技術(shù)支持做堅實地基礎(chǔ)。 通過剛果紅鑒別培養(yǎng)基染色法，選取水解圈較大生長速度快的菌種共5株分別為2號，4號，8號，15號和18號。其中18號菌水解圈最大生長速度最快。單獨測定18號的CMC酶活和FPA酶活是單菌株中最高的。 分子鑒定結(jié)果表明：應(yīng)用試劑盒提取DNA，進行PCR擴增，測序后，經(jīng)BLAST基因庫比對，確定2號菌株是枯草芽孢桿菌亞種，4號菌株是芽孢桿菌，8號菌株是蠟樣芽胞桿菌，18號菌株是芽胞短桿菌，而15號菌株是枯草芽孢桿菌。 發(fā)酵條件優(yōu)化：外加碳源為蔗糖與松針粉末質(zhì)量比為2:1，外加氮源為尿素，初始pH值為7.55，添加表面活性劑...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 纖維素歷程的研究
        1.1.1 纖維素的結(jié)構(gòu)及其來源
        1.1.2 纖維素的生物降解
    1.2 降解纖維素的細(xì)菌類菌株
        1.2.1 纖維素的好氧性的降解菌
        1.2.2 厭氧類纖維素發(fā)酵菌
        1.2.3 好氧的滑行細(xì)菌
        1.2.4 細(xì)菌降解纖維素的機理
    1.3 纖維素降解酶的類型
        1.3.1 內(nèi)切型的纖維素酶
        1.3.2 外切型纖維素酶
        1.3.3 纖維二糖酶
        1.3.4 纖維素酶的水解機理
        1.3.5 影響纖維素降解的因素
    1.4 復(fù)合型菌劑微生物的動態(tài)研究
    1.5 表面活性劑對酶活力的影響
    1.6 實驗的目的和意義研究
        1.6.1 實驗的研究目的
        1.6.2 研究意義
    1.7 研究內(nèi)容、方法和技術(shù)路線
        1.7.1 研究內(nèi)容和方法
        1.7.2 技術(shù)路線
    1.8 課題來源
2 材料與方法
    2.1 松針纖維素降解細(xì)菌的篩選與鑒定
        2.1.1 篩選菌株的來源
        2.1.2 培養(yǎng)基的配方
        2.1.3 菌株的分離與純化
        2.1.4 菌株的形態(tài)學(xué)鑒定及生理生化鑒定的研究
    2.2 松針纖維素降解細(xì)菌液體發(fā)酵條件優(yōu)化的研究
        2.2.1 優(yōu)化菌株的材料
        2.2.2 配置培養(yǎng)基成分
        2.2.3 試劑的配制
        2.2.4 主要儀器
        2.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
    2.3 實驗中涉及的方法
        2.3.1 纖維素酶活力的方法測定步驟
        2.3.2 各種纖維素酶活性的測定方法
        2.3.3 纖維素分解菌液態(tài)發(fā)酵條件優(yōu)化
    2.4 松針纖維素降解混合細(xì)菌2’4’8組合的酶學(xué)特性的研究
        2.4.1 最適酶反應(yīng)的pH值
        2.4.2 pH值對松針降解細(xì)菌的穩(wěn)定性
        2.4.3 酶最適反應(yīng)溫度
        2.4.4 酶的熱穩(wěn)定性
        2.4.5 金屬離子對酶活性的影響
3 實驗的結(jié)果和實驗分析
    3.1 富集和純化及菌株鑒定
        3.1.1 形態(tài)鑒定菌株
        3.1.2 菌株的生理生化鑒定
        3.1.3 菌株的分子鑒定
        3.1.4 16SrDNA 序列的系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建
    3.2 松針降解菌液體發(fā)酵培養(yǎng)研究
        3.2.1 松針降解菌液體發(fā)酵培養(yǎng)
        3.2.2 松針降解菌混合培養(yǎng)
    3.3 混合菌株2’4’8組合產(chǎn)酶條件優(yōu)化
        3.3.1 發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化
    3.4 混合菌株2’4’8組合纖維素酶酶學(xué)性質(zhì)的研究
        3.4.1 混合菌株2’4’8組合的CMC酶活力的最適pH值
        3.4.2 CMC酶活力的pH值穩(wěn)定性
        3.4.3 羧甲基纖維素酶最適溫度
        3.4.4 CMC酶活力的熱穩(wěn)定性
        3.4.5 金屬離子對CMC酶活力的影響
    3.5 混合菌株2’4’8組合的半纖維素酶酶學(xué)性質(zhì)的研究
        3.5.1 松針降解菌半纖維素酶最適pH值
        3.5.2 松針降解菌半纖維素酶pH值穩(wěn)定性
        3.5.3 松針降解菌半纖維素酶反應(yīng)的最適合溫度
        3.5.4 松針降解菌半纖維素酶熱穩(wěn)定性的測定
        3.5.5 金屬離子對半纖維素酶活力的影響
4 討論
    4.1 對產(chǎn)纖維素酶細(xì)菌的篩選及分子生物學(xué)研究
    4.2 細(xì)菌產(chǎn)纖維素酶的制約因素
    4.3 混合組合的纖維素酶及半纖維素酶酶學(xué)特性的研究
    4.4 松針的應(yīng)用研究
    4.5 前景分析
5 結(jié)論
    5.1 菌株篩選及鑒定
    5.2 菌株液體發(fā)酵培養(yǎng)研究
    5.3 混合菌株2’4’8的纖維素酶及半纖維素酶進行酶學(xué)性質(zhì)的研究
致謝
參考文獻
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3762442