云杉矮槲寄生作為一種寄生在云杉上的寄生性種子植物,已成為三江源地區(qū)云杉林的毀滅性病害,其危害性之大、潛育期之長及侵染特點復(fù)雜等妨礙了云杉矮槲寄生的防治。為了實現(xiàn)云杉矮槲寄生害的早期診斷、證實云杉矮槲寄生的系統(tǒng)侵染特點,為云杉苗木的栽培調(diào)運(yùn)和云杉矮槲寄生的防治提供技術(shù)支持,本文基于Real-TimePCR和環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)(LAMP)方法,建立了云杉矮槲寄生的快速、靈敏的檢測方法,通過對田間樣品的檢測初步證實云杉矮槲寄生的系統(tǒng)侵染特點以及在寄主體內(nèi)與寄主枝條是否發(fā)生同步生長,為云杉矮槲寄生害的防治提供參考。1、比對云杉矮槲寄生與其寄主云杉的序列,基于Real-Time PCR、環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)(LAMP)兩種方法分別設(shè)計云杉矮槲寄生的特異性引物,通過對反應(yīng)體系和反應(yīng)條件的優(yōu)化,建立了Real-Time PCR和LAMP兩種云杉矮槲寄生的分子檢測方法。Real-Time PCR技術(shù)檢測云杉矮槲寄生自動化程度高、能有效避免污染；LAMP技術(shù)操作簡單,不需要特定的儀器設(shè)備,結(jié)果可根據(jù)羥基萘酚藍(lán)(HNB)的顯色反應(yīng)判定,比較適合在基層的推廣。2、為了檢測Real-Time PCR和LAMP引...

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．２．１－２?ＰＣＲ的靈敏度試驗??Ｆｉｇ?２．２．１－２?Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ?ｏｆ?ＬＡＭＰ??

云杉矮槪寄生快速分子檢測方法的建立及應(yīng)用??丄４?ＰＣＲ引物的靈敏性檢測??為了檢驗ＰＣＲ反應(yīng)的靈敏性，將云杉矮搬寄生的ＤＮＡ進(jìn)行梯度�。�、１０°、１０－１、１０－２、１０－３、１０＂＼?１０－５、ｌＯ＇＾、１０－７、１０－８、１〇－９１巧／叫＾等多ＰＣ民反應(yīng)，根據(jù)電泳圖結(jié)果表明....

圖２．２．２－１?ＲｅａＫＴｉｍｅ?ＰＣＲ特異性檢測結(jié)果??Ｆｉｇ２．２．２－１?Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ?ｏｆ?民ｅａｌ－Ｔｉｍｅ?ＰＣ民??

ＲＴ－Ｆｌ?０．６??ＲＴ－Ｒｌ?０．６??５０ｘＲＯＸ?Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ?Ｄｙｅ?Ａ?０．４??ＤＮＡ模板?１??Ｒｎａｓｅ－ｆｒｅｅ?（１姐２〇?至?２０咕劑盆采用兩步法反應(yīng)程序：９５°Ｃ，?ｌＯｍｍ；?９５°Ｃ，１５ｓ，６解曲線分析。??－Ｔｉｍｅ?ＰＣＲ引物的特異性檢巧....

圖２．２．２－１?ＬＡＭＰ引物篩選試驗??Ｈｇ?２．２．２－１?Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＬＡＭＰ?ｐｒｉｍｅｒｓ??＝ｒｒ＝１１４＝云１２５＝

圖２．２．２－１?ＬＡＭＰ引物篩選試驗??Ｈｇ?２．２．２－１?Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＬＡＭＰ?ｐｒｉｍｅｒｓ??Ｍ＝ＤＬ２０００Ｍａｒｋｅｒ；?１，４，７，１０，１３＝云杉矮撫［寄生；２，５，８，１１，１４＝健康青海云杉；３，６，９，１２，１５＝空白對照。??注：ａ圖....

圖２．２．２－２ＬＡＭＰ引物結(jié)構(gòu)示意圖??Ｆｉｇ?２．２．２－２?Ｄｅｓｉｇｎ?ｏｆ?ＬＡＭＰ?ｐｒｉｍｅｒｓ??（ａ）云杉矮懈寄生葉緑體基因目標(biāo)區(qū)域序列比對

ａ?Ｉ?１?１?１?１?１?１??Ｍｍｍ?ＷＰ／１Ｗ?２－ＲＰ／２－６ＩＰ／?？＾Ｐ／３－ＢＩＰ?４－ＲＰ／４－ＢＩＰ?Ｓ－ＲＰ／Ｓ－ＢＩＦ??１－Ｆ３／１－Ｂ３?２－Ｆ３／３－Ｂ３?３－ｆ３／３－Ｂ３?４－Ｆ３／４－Ｂ３?５－Ｆ３／Ｓ－Ｂ３??Ｈ＾＾ＶＨＢＷＷＶＨＶＰＷＭＫ＾ａ....

本文編號：3925355