毛果楊(Popolus trichocarpa)具有基因組相對較小、染色體數(shù)目少、生長速度快、無性繁殖容易等特點,是第一個全基因組測序的木本植物,其遺傳轉(zhuǎn)化對木本植物功能基因組學(xué)的研究具有極其重要的意義。本研究分別以毛果楊組培苗的莖段和葉片作為外植體,研究了不同取材部位、接種方式及外源激素組合對不定芽誘導(dǎo)的影響,建立了高效的毛果楊組培再生體系。在此基礎(chǔ)上探討了菌液濃度、侵染時間、共培養(yǎng)時間、乙酰丁香酮濃度及添加方式對遺傳轉(zhuǎn)化率的影響,建立了高效的毛果楊遺傳轉(zhuǎn)化體系,并對轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行了檢測。本文的主要研究結(jié)果如下：1.以溫室培養(yǎng)的毛果楊嫩枝為基礎(chǔ)材料,確定了毛果楊枝條的最適無菌處理條件。用70%酒精消毒30 sec,再用3%NaClO消毒8 min,無菌水清洗3遍,最后用無菌濾紙吸干材料表面的水分,接種到生根培養(yǎng)基上,15d污染率為0。2.建立了毛果楊組培苗莖段和葉片直接誘導(dǎo)不定芽的再生體系。莖段分化的最佳取材部位是形態(tài)學(xué)上端第二、三節(jié)莖段,不定芽分化的最適培養(yǎng)基為WPM+0.03 mg·L-1 6-BA+0.02 mg·L-1 IBA+0.0008 mg·L-1 TDZ,培養(yǎng)25 d分...

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
1 緒論
    1.1 引言
    1.2 楊樹組培再生研究進(jìn)展
        1.2.1 國外楊樹組培再生研究
        1.2.2 國內(nèi)楊樹組培再生研究
        1.2.3 楊樹組培再生途徑研究
    1.3 楊樹遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展
        1.3.1 遺傳轉(zhuǎn)化方法
        1.3.2 楊樹遺傳轉(zhuǎn)化的影響因素
    1.4 毛果楊研究進(jìn)展
        1.4.1 毛果楊基因相關(guān)研究
        1.4.2 毛果楊再生及遺傳轉(zhuǎn)化研究
    1.5 本研究的目的意義
2 毛果楊組培再生體系的建立
    2.1 材料與方法
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 試劑
        2.1.3 儀器及用具
        2.1.4 研究方法
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 材料無菌處理結(jié)果分析
        2.2.2 不同外源激素組合對莖段分化的影響
        2.2.3 莖段的取材部位對分化的影響
        2.2.4 不同外源激素組合對葉片分化的影響
        2.2.5 葉片的取材部位對分化的影響
        2.2.6 葉片的接種方式對分化的影響
        2.2.7 外源激素濃度對不定芽生根的影響
        2.2.8 再生苗的煉苗和移栽
    2.3 討論
        2.3.1 莖段外植體的組培再生
        2.3.2 葉片外植體的組培再生
    2.4 本章小結(jié)
3 毛果楊遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立
    3.1 材料與方法
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 質(zhì)粒和菌株
        3.1.3 試劑
        3.1.4 儀器及用具
        3.1.5 培養(yǎng)基種類
        3.1.6 研究方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 卡那霉素對不定芽誘導(dǎo)及生根的影響
        3.2.2 頭孢霉素對不定芽誘導(dǎo)的影響
        3.2.3 菌液濃度及侵染時間對轉(zhuǎn)化率的影響
        3.2.4 共培養(yǎng)時間對轉(zhuǎn)化率的影響
        3.2.5 乙酰丁香酮的濃度及添加方式對轉(zhuǎn)化率的影響
        3.2.6 抗性植株的獲得
    3.3 討論
        3.3.1 抗生素臨界濃度的選擇
        3.3.2 影響遺傳轉(zhuǎn)化的主要因素
    3.4 本章小結(jié)
4 抗性植株檢測
    4.1 材料與方法
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 試劑及配制方法
        4.1.3 儀器及用具
        4.1.4 研究方法
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 GUS染色結(jié)果
        4.2.2 PCR檢測結(jié)果
        4.2.3 RT-PCR檢測結(jié)果
    4.3 討論
    4.4 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝



本文編號：3893745