楊樹(shù)是我國(guó)主要的人工林樹(shù)種之一,扦插繁殖是其主要的育苗和造林手段。而插穗不定根的形成與發(fā)育是影響扦插成功的關(guān)鍵因素,也是包括楊樹(shù)在內(nèi)的大多數(shù)木本植物無(wú)性繁殖和工廠化育苗的限制因素。本研究通過(guò)在楊樹(shù)中構(gòu)建所挖掘基因的超表達(dá)轉(zhuǎn)基因突變體(OE),對(duì)突變體進(jìn)行不定根相關(guān)性狀的鑒定。鑒定結(jié)果顯示有2個(gè)基因表現(xiàn)出增強(qiáng)了AR發(fā)育的能力,基因分別命名為WZ4(一種CML蛋白)和XZ6(一種NAC轉(zhuǎn)錄因子)。對(duì)WZ4-OE轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行了精細(xì)地鑒定。主要研究進(jìn)展如下:1、通過(guò)對(duì)在WPM培養(yǎng)基中培養(yǎng)的南林895楊(P.deltoids×P.euramericana)組培苗不定根生根動(dòng)態(tài)觀測(cè),以及制作南林895楊組培苗莖段基部的石蠟切片,統(tǒng)計(jì)插穗扦插至WPM后第0-8天5個(gè)時(shí)間點(diǎn)上不定根原基的發(fā)生率,確定了楊樹(shù)不定根形成的主要時(shí)間節(jié)點(diǎn)。提取相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的楊樹(shù)插條基部RNA,進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析,按照一定的閾值和篩選方案,從中挑選出6個(gè)可能參與楊樹(shù)不定根形成與發(fā)育的候選基因,這些基因?qū)?yīng)毛果楊參考基因組編號(hào)為Potri.017G126200、Potri.002G065600、Potri.014G103000、Po...

【文章頁(yè)數(shù)】：97 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞
1 緒論
    1.1 引言
    1.2 不定根的定義
    1.3 植物不定根發(fā)育調(diào)控研究進(jìn)展
        1.3.1 植物激素對(duì)不定根形成的調(diào)控
        1.3.2 一氧化氮對(duì)不定根形成的調(diào)控
        1.3.3 過(guò)氧化氫對(duì)不定根形成的調(diào)控
        1.3.4 Ca²⁺對(duì)不定根形成的調(diào)控
        1.3.5 外界環(huán)境對(duì)不定根形成的影響
        1.3.6 遺傳因素對(duì)不定根形成的調(diào)控
    1.4 楊樹(shù)不定根的國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展
        1.4.1 生理水平研究進(jìn)展
        1.4.2 分子水平研究進(jìn)展
    1.5 本研究的目的和意義
    1.6 技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株和質(zhì)粒
        2.1.3 抗生素和激素
        2.1.4 主要儀器和試劑
        2.1.5 植物培養(yǎng)基
        2.1.6 微生物培養(yǎng)基
        2.1.7 常用試劑配制
    2.2 篩選不定根相關(guān)調(diào)控基因
        2.2.1 楊樹(shù)組培苗不定根發(fā)育動(dòng)態(tài)變化觀測(cè)
        2.2.2 楊樹(shù)組培苗不定根原基動(dòng)態(tài)變化觀測(cè)
        2.2.3 RNA抽提
        2.2.4 DNA抽提
        2.2.5 基于RNA-Seq的轉(zhuǎn)錄組分析
        2.2.6 cDNA的合成與純化
        2.2.7 熒光定量qRT-PCR
        2.2.8 目的基因的超表達(dá)載體構(gòu)建
        2.2.9 亞細(xì)胞定位
        2.2.10 目的基因抑制表達(dá)載體構(gòu)建
        2.2.11 目的基因超表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系的建立和陽(yáng)性鑒定
        2.2.12 不定根候選調(diào)控基因的轉(zhuǎn)基因株系不定根初步表型鑒定
    2.3 不定根候選調(diào)控基因的功能初步鑒定
        2.3.1 不定根候選基因轉(zhuǎn)基因株系不定根表型鑒定
        2.3.2 WZ4超表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系轉(zhuǎn)錄組分析
        2.3.3 WZ4基因的啟動(dòng)子特性分析
        2.3.4 WZ4基因的酵母單雜
        2.3.5 WZ4超表達(dá)株系不定根細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)含量初步測(cè)定
3 結(jié)果與分析
    3.1 篩選不定根相關(guān)候選調(diào)控基因
        3.1.1 楊樹(shù)組培苗不定根發(fā)育動(dòng)態(tài)變化
        3.1.2 楊樹(shù)組培苗不定根原基動(dòng)態(tài)變化
        3.1.3 楊樹(shù)DAE0-DAE8 差異表達(dá)基因分析
        3.1.4 不定根候選調(diào)控基因表達(dá)驗(yàn)證
        3.1.5 不定根候選調(diào)控基因亞細(xì)胞定位
        3.1.6 不定根候選調(diào)控基因的轉(zhuǎn)化與驗(yàn)證
        3.1.7 不定根候選調(diào)控基因轉(zhuǎn)基因株系不定根表型鑒定
    3.2 WZ4基因功能分析
        3.2.1 WZ4轉(zhuǎn)基因苗不定根表型鑒定
        3.2.2 WZ4基因序列和表達(dá)特征分析
        3.2.3 WZ4超表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系轉(zhuǎn)錄組分析
        3.2.4 WZ4的啟動(dòng)子特性分析
        3.2.5 WZ4基因酵母單雜
        3.2.6 WZ4超表達(dá)株系不定根細(xì)胞內(nèi)Ca2+和生長(zhǎng)素測(cè)定
4 結(jié)論與討論
    4.1 結(jié)論
    4.2 討論
        4.2.1 轉(zhuǎn)錄組學(xué)篩選候選基因的效率
        4.2.2 楊樹(shù)不定根形成過(guò)程中存在復(fù)雜的生物過(guò)程
        4.2.3 推測(cè)WZ4基因參與調(diào)控楊樹(shù)不定根發(fā)育的機(jī)理
        4.2.4 本研究的不足
參考文獻(xiàn)
附錄
碩士在讀期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號(hào)：3854092