松樹萎蔫病是松屬植物的一種毀滅性疾病,松材線蟲(Bursaphelenchus xylophilus)是松樹萎蔫病的重要病原物,該疾病在全球范圍內(nèi)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失和環(huán)境破壞。從自然界中尋找對松材線蟲具有高致死性的微生物及其代謝產(chǎn)物已成為研發(fā)新型殺線蟲劑的一個(gè)研究熱點(diǎn)。本文對從青島麥島近海海域采集的樣品采用稀釋涂布平板法分離共得到21株海洋放線菌,使用浸漬法對放線菌培養(yǎng)濾液進(jìn)行殺松材線蟲活性測定,從中篩選出了1株具有較高殺線活性的放線菌HT-8。該菌株分離自海泥,其培養(yǎng)濾液處理松材線蟲72 h,松材線蟲的校正死亡率高達(dá)88.30%。通過形態(tài)學(xué)觀察,生理生化特性和16S rDNA序列測定及其系統(tǒng)發(fā)育分析,將菌株HT-8鑒定為白蟻鏈霉菌(Streptomyces termitum)。采用單因素法分析菌株HT-8的最佳培養(yǎng)條件,結(jié)果表明,產(chǎn)殺線活性物質(zhì)的最適培養(yǎng)基海水濃度、起始pH、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間分別為1000 mL/L、pH7.5、25℃、7 d;最適接種體菌齡和接種量分別為48 h和6%。對培養(yǎng)基海水濃度、起始pH、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行正交試驗(yàn),結(jié)果表明,菌株HT-8的培養(yǎng)濾液殺...

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一章 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.1 分離樣品來源與供試蟲源
        1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        1.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 松材線蟲的培養(yǎng)
        1.2.2 培養(yǎng)基的配制
        1.2.3 海洋放線菌的分離
        1.2.4 殺線蟲放線菌菌株的篩選
        1.2.5 放線菌HT-8的分類鑒定
        1.2.6 海水濃度，初始pH，培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間對菌株HT-8培養(yǎng)濾液殺線蟲活性的影響
        1.2.7 菌株HT-8培養(yǎng)條件的正交優(yōu)化
        1.2.8 菌株HT-8菌體胞內(nèi)物質(zhì)殺線活性測定
        1.2.9 菌株HT-8的培養(yǎng)濾液中活性物質(zhì)穩(wěn)定性的測定
        1.2.10 菌株HT-8殺線蟲活性物質(zhì)提取
        1.2.11 菌株HT-8殺線蟲活性物質(zhì)分離和純化
第二章 結(jié)果與分析
    2.1 菌株的分離、篩選和殺線蟲活性的測定
    2.2 殺線蟲海洋放線菌HT-8的分類鑒定
        2.2.1 形態(tài)特征及生理生化特性
        2.2.2 菌株HT-8的16S rDNA序列分析及系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建
    2.3 不同培養(yǎng)條件對菌株HT-8的培養(yǎng)濾液殺線蟲活性影響
        2.3.1 海水濃度、初始pH值、培養(yǎng)溫度及培養(yǎng)時(shí)間對菌株HT-8培養(yǎng)濾液殺線蟲活性的影響
        2.3.2 菌齡和接種量對菌株HT-8培養(yǎng)濾液殺線蟲活性的影響
    2.4 菌株HT-8培養(yǎng)條件的正交優(yōu)化
    2.5 菌株HT-8菌體胞內(nèi)物質(zhì)殺線活性測定
    2.6 菌株HT-8的培養(yǎng)濾液中活性物質(zhì)穩(wěn)定性的測定
        2.6.1 熱穩(wěn)定性
        2.6.2 酸堿度穩(wěn)定性
    2.7 菌株HT-8的不同溶劑提取物殺線活性分析
    2.8 菌株H-8的乙酸乙酯提取物活性成分的分離及活性測定
第三章 討論
第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    一、松樹萎蔫病的研究歷史
    二、松樹萎蔫病病原體的發(fā)現(xiàn)
    三、松墨天牛的生物學(xué)特征
    四、松材線蟲侵染松樹循環(huán)路徑
    五、相關(guān)細(xì)菌對松樹萎蔫病的影響
    六、相關(guān)真菌對松樹萎蔫病的影響
    七、松樹死亡機(jī)制假說
    八、松樹萎蔫病控制策略
    九、展望
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間研究成果
致謝



本文編號：3846356