蘇鐵(Cycas revoluta Thunb.)俗稱鐵樹,是蘇鐵科(Cycadaceae)、蘇鐵屬(Cycas)的一種優(yōu)美的觀賞樹種。攀枝花蘇鐵(Cycas panzhihuaensis L.Zhou et S.Y.Yang),是蘇鐵科(Cycadaceae)、蘇鐵屬(Cycas)的一種植物,為國家一級保護(hù)植物,是我國特有樹種。因其四季常綠,優(yōu)美的外形,被大量用于城市綠化建設(shè)中,備受人們青睞。然而,由于攀枝花蘇鐵自然授粉率、結(jié)實(shí)率和種子的可育率較低等問題,給攀枝花蘇鐵的保育工作帶來了巨大困難。分析原因主要與蘇鐵菌根密切相關(guān),菌根能給植物提供生長發(fā)育所必需的營養(yǎng)元素,因此,研究攀枝花蘇鐵菌根體系的構(gòu)建和營養(yǎng)關(guān)系,既能為蘇鐵的快速繁育和生長提供更好的條件,又能為建立人工種植技術(shù)和再引入恢復(fù)種群技術(shù)提供理論指導(dǎo),具有重要的實(shí)踐意義。本研究以攀枝花蘇鐵為研究材料,將前期野外采集的蘇鐵珊瑚狀根,分離篩選出內(nèi)生放線菌優(yōu)勢菌株,接種到無菌的攀枝花蘇鐵根部,經(jīng)共生培養(yǎng)建立共生體系后,利用石蠟切片法觀察攀枝花蘇鐵珊瑚狀根的顯微結(jié)構(gòu)及重分離培養(yǎng)法證明植物-微生物兩者共生體系的形成;用免培養(yǎng)方法構(gòu)建16S...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 前言
    1.1 蘇鐵保育的研究現(xiàn)狀和前景
    1.2 蘇鐵形態(tài)解剖學(xué)研究
    1.3 蘇鐵與內(nèi)生放線菌研究
        1.3.1 植物的內(nèi)生菌及其作用研究
        1.3.2 植物內(nèi)生菌天然產(chǎn)物的獲取及應(yīng)用研究
        1.3.3 植物內(nèi)生放線菌研究
        1.3.4 植物內(nèi)生放線菌多樣性及分離方法研究
        1.3.5 植物內(nèi)生放線菌宿主多樣性研究
    1.4 植物內(nèi)生放線菌的作用研究
        1.4.1 內(nèi)生放線菌對宿主植物的作用研究
        1.4.2 內(nèi)生放線菌對蘇鐵的影響
        1.4.3 內(nèi)生放線菌的應(yīng)用前景
            1.4.3.1 在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的應(yīng)用前景
            1.4.3.2 在醫(yī)藥新藥開發(fā)上的應(yīng)用
    1.5 攀枝花蘇鐵根的營養(yǎng)關(guān)系研究
        1.5.1 攀枝花蘇鐵根的養(yǎng)分含量研究
        1.5.2 采用同位素示蹤法對微生物和植物之間的營養(yǎng)關(guān)系研究
    1.6 研究思路及內(nèi)容
        1.6.1 研究思路
        1.6.2 研究內(nèi)容
    1.7 研究目的
2 構(gòu)建攀枝花蘇鐵與放線菌優(yōu)勢菌株的共生系統(tǒng)
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 接種優(yōu)勢菌株
        2.1.3 接種方案
        2.1.4 接種效應(yīng)檢測
    2.2 結(jié)果與分析
    2.3 討論
        2.3.1 沙培和土培結(jié)瘤結(jié)果的比較
        2.3.2 攀枝花蘇鐵的接種方法
3 攀枝花蘇鐵珊瑚狀根形態(tài)解剖學(xué)結(jié)構(gòu)研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 攀枝花蘇鐵珊瑚狀根顯微結(jié)構(gòu)觀察
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 攀枝花蘇鐵珊瑚狀根形態(tài)解剖學(xué)結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果
    3.3 討論
        3.3.1 攀枝花蘇鐵珊瑚狀根的形成
4 利用純培養(yǎng)法對攀枝花蘇鐵珊瑚狀根內(nèi)生放線菌重分離
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 攀枝花蘇鐵珊瑚狀根的清洗
        4.1.3 攀枝花蘇鐵珊瑚狀根表面滅菌處理
            4.1.3.1 表面滅菌處理前的準(zhǔn)備操作
            4.1.3.2 表面滅菌操作
        4.1.4 表面滅菌效應(yīng)檢測
        4.1.5 培養(yǎng)基的選擇與成分
        4.1.6 攀枝花蘇鐵珊瑚狀根內(nèi)生放線菌重分離操作
        4.1.7 攀枝花蘇鐵內(nèi)生放線菌的初步劃線分離
        4.1.8 重分離攀枝花蘇鐵珊瑚狀根內(nèi)生放線菌的多樣性
            4.1.8.1 內(nèi)生放線菌DNA的提取
            4.1.8.2 放線菌的PCR擴(kuò)增
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 植物表面滅菌效果
        4.2.2 三種培養(yǎng)基重分離效果
        4.2.3 鑒定重分離的菌株
            4.2.3.1 不同時(shí)期的攀枝花蘇鐵珊瑚狀根內(nèi)生放線菌多樣性比較
            4.2.3.2 對重分離的優(yōu)勢菌株分析
    4.3 討論
        4.3.1 內(nèi)生放線菌培養(yǎng)基質(zhì)的選擇
        4.3.2 不同時(shí)期分離的內(nèi)生放線菌的多樣性
5 利用16SrRNA基因克隆文庫構(gòu)建野生攀枝花蘇鐵珊瑚狀根內(nèi)生放線菌多樣性
    5.1 材料與方法
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.2 攀枝花蘇鐵珊瑚狀根總DNA的提取
            5.1.2.1 珊瑚狀根原生質(zhì)體的制備與內(nèi)生微生物的富集
            5.1.2.2 攀枝花蘇鐵珊瑚狀根總DNA的提取
        5.1.3 16SrRNA基因克隆文庫的構(gòu)建
            5.1.3.1 16SrRNA基因的PCR擴(kuò)增
        5.1.4 攀枝花蘇鐵珊瑚狀根16SrRNA片段的克隆
            5.1.4.1 PCR產(chǎn)物純化回收
            5.1.4.2 連接
            5.1.4.3 轉(zhuǎn)化與藍(lán)白斑挑選
            5.1.4.4 陽性克隆篩選
            5.1.4.5 送樣測定
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 植物表面滅菌處理
        5.2.2 攀枝花蘇鐵珊瑚狀根總DNA的提取
        5.2.3 16SrRNA基因片段的擴(kuò)增
        5.2.4 陽性克隆的檢測結(jié)果
        5.2.5 珊瑚狀根中16SrRNA序列分析
    5.3 討論
        5.3.1 免培養(yǎng)法的利弊
        5.3.2 純培養(yǎng)法和免培養(yǎng)法的比較
6 攀枝花蘇鐵菌根與無菌苗根的養(yǎng)分分析
    6.1 材料與方法
        6.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        6.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    6.2 結(jié)果與分析
    6.3 討論
        6.3.1 接種放線菌后攀枝花蘇鐵根部的養(yǎng)分變化
        6.3.2 蘇鐵培養(yǎng)方式展望
7 采用同位素示蹤法研究菌根改變攀枝花蘇鐵氮素的吸收形式
    7.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        7.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        7.1.2 ¹⁵N標(biāo)記法
        7.1.3 植物材料的¹⁵N/¹⁴N分析與計(jì)算
    7.2 結(jié)果與分析
        7.2.1 N原子的轉(zhuǎn)移量與轉(zhuǎn)移方向
        7.2.2 放線菌對攀枝花蘇鐵有機(jī)氮和無機(jī)氮吸收的影響
    7.3 討論
8 接種內(nèi)生放線菌對攀枝花蘇鐵生物量的影響
    8.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        8.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        8.1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
    8.2 結(jié)果與分析
        8.2.1 生物量的變化研究
            8.2.1.1 植株高度的變化
            8.2.1.2 結(jié)瘤量的變化
    8.3 討論
        8.3.1 生物量的測定
9 結(jié)論
    9.1 本研究的主要結(jié)論
    9.2 問題與展望
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡介
導(dǎo)師簡介
致謝



本文編號：3805759