珙桐(Davidia involucrata Baill.)為珙桐科珙桐屬落葉喬木,第三紀(jì)古熱帶植物孑遺種,我國(guó)特有的珍稀植物,國(guó)家I級(jí)重點(diǎn)保護(hù)瀕危物種,具有極高的觀賞價(jià)值和學(xué)術(shù)研究?jī)r(jià)值。本研究從珙桐果實(shí)及種子轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選到一個(gè)編碼調(diào)控原花青素生物合成的MYB轉(zhuǎn)錄因子的基因DiMYB1,對(duì)其進(jìn)行了克隆及功能分析。主要研究結(jié)果如下:1.珙桐DiMYB1基因的克隆及生物信息學(xué)分析。根據(jù)珙桐果實(shí)及種子轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)中該基因的ORF序列設(shè)計(jì)特異引物,以珙桐敗育種子的cDNA為模板進(jìn)行RCR擴(kuò)增得到全長(zhǎng)序列,并在GenBank上登錄,登錄號(hào)為KR996175。利用在線軟件對(duì)該基因序列進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。2.DiYB1基因的表達(dá)模式。①DiMYB1基因在珙桐芽、葉片、苞片、果肉、種子中的表達(dá)量qPCR分析。結(jié)果表明,DiMYB1基因在紫色幼葉中的表達(dá)量最高,其次是雄蕊,在芽、莖、成熟葉片、苞片、果肉和種子中微量表達(dá)。②DiMYB1基因在正常和敗育種子中的表達(dá)模式。qPCR分析結(jié)果表明,D/MYB1基因在敗育種子中的表達(dá)量顯著高于正常種子,且在中期敗育種子中的表達(dá)量達(dá)到最高。③DiMYB/基因...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1. 緒論
    1.1 珙桐簡(jiǎn)介
    1.2 選題背景及課題的研究意義
    1.3 MYB轉(zhuǎn)錄因子概述
    1.4 原花青素簡(jiǎn)介
    1.5 MYB轉(zhuǎn)錄因子研究進(jìn)展
    1.6 技術(shù)路線
2. 珙桐DiMYB1基因的克隆及生物信息學(xué)分析
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 工具酶及試劑
        2.1.3 菌株及載體
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 珙桐種子總RNA的提取
        2.2.2 克隆引物設(shè)計(jì)
        2.2.3 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物回收
        2.2.4 A-T克隆
        2.2.5 陽(yáng)性篩選及鑒定
        2.2.6 基因生物信息學(xué)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 珙桐種子RNA的提取
        2.3.2 珙桐DiMYB1基因的克隆
        2.3.3 珙桐DiMYB1基因的生物信息學(xué)分析
    2.4 討論
3. 珙桐DiMYB1基因的qPCR表達(dá)分析
    3.1 珙桐DiMYB1基因在珙桐各組織器官中的表達(dá)分析
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
        3.1.3 結(jié)果
        3.1.4 討論
    3.2 珙桐DiMYB1基因在珙桐不同顏色葉片中的表達(dá)量及相關(guān)性分析
        3.2.1 材料
        3.2.2 方法
        3.2.3 結(jié)果
        3.2.4 討論
4. 珙桐DiMYB1基因的原核表達(dá)
    4.1 材料
        4.1.1 載體和菌株
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)溶液及儀器
    4.2 方法
        4.2.1 pET-28a (+)-DiMYB1表達(dá)載體構(gòu)建
        4.2.2 融合蛋白的表達(dá)
        4.2.3 pET-28a (+)-DiMYB 1重組蛋白的純化
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 原核表達(dá)載體的構(gòu)建及重組子的鑒定
        4.3.2 珙桐pET28a(+)-DiMYB 1融合蛋白的原核表達(dá)及SDS-PAGE檢測(cè)
        4.3.3 表達(dá)產(chǎn)物的純化
    4.4 討論
5. DiMYB1基因功能的初步驗(yàn)證
    5.1 材料
        5.1.1 植物材料、載體和菌株
        5.1.2 酶和試劑
        5.1.3 溶液配制
        5.1.4 主要儀器設(shè)備
        5.1.5 引物設(shè)計(jì)
    5.2 方法
        5.2.0 目的基因片段的制備
        5.2.1 pBI-121表達(dá)載體的制備
        5.2.2 構(gòu)建植物表達(dá)載體pBI-121-DiMYB1
        5.2.3 土壤農(nóng)桿菌GV3101感受態(tài)的制備及轉(zhuǎn)化
        5.2.4 擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化
        5.2.5 轉(zhuǎn)基因擬南芥的篩選、鑒定及表型觀察
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 植物超表達(dá)載體的鑒定
        5.3.2 PCR鑒定農(nóng)桿菌菌液
        5.3.3 轉(zhuǎn)珙桐DiMYB1基因的擬南芥篩選及PCR檢測(cè)
    5.4 討論
6. 總結(jié)、創(chuàng)新點(diǎn)與展望
    6.1 總結(jié)
    6.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    6.3 研究展望
參考文獻(xiàn)
附錄A 常用溶液配制
附錄B 攻讀碩士學(xué)位期間的主要學(xué)術(shù)成果
致謝



本文編號(hào)：3788226