基于PCR技術(shù)的木材腐朽菌快速鑒定方法的研究
發(fā)布時(shí)間:2022-12-18 00:32
近年來,我國的森林資源面臨著嚴(yán)重的短缺問題,木材的供需矛盾日益尖銳。如何合理的利用和節(jié)省木材資源,是一個(gè)急需解決的問題,保證木材優(yōu)越的質(zhì)量顯得尤為重要。在影響木材質(zhì)量的眾多因素中,由木材腐朽菌侵染木材而引起的木材腐朽現(xiàn)象十分常見。木材腐朽每年造成大量的木材資源流失,降低了木材的質(zhì)量,嚴(yán)重影響木材的使用。為保護(hù)木材資源和合理地使用木材,人們對(duì)木材腐朽及木材腐朽菌作了廣泛而深入的研究。目前鑒定木材腐朽菌的方法主要有兩種,一種是傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)鑒定方法,即通過觀察菌落的宏觀培養(yǎng)特性和微觀培養(yǎng)特性的特征來對(duì)菌種進(jìn)行鑒定和分類;另一種是近年來發(fā)展起來的分子水平的鑒定方法,即利用PCR技術(shù)快速鑒定出木材腐朽的病原菌。本文首先通過大量實(shí)驗(yàn)分別摸索出最適宜木材腐朽菌A、B生長(zhǎng)的最適溫度、pH值、光照強(qiáng)度、液體培養(yǎng)時(shí)搖晃轉(zhuǎn)速。之后通過形態(tài)學(xué)鑒定方法,觀察并記錄兩種木材腐朽菌菌落的生長(zhǎng)率、菌落形狀、菌落質(zhì)地、菌落顏色、培養(yǎng)基的顏色變化以及菌落邊緣菌絲的特征、培養(yǎng)基中主要菌絲的類型、產(chǎn)孢情況等,用傳統(tǒng)的方法對(duì)兩種木材腐朽菌進(jìn)行鑒定,鑒別出了木材腐朽菌A為擔(dān)子菌綱、多孔菌目、多孔菌科、栓菌屬的真菌,木材腐朽菌B屬...
【文章頁數(shù)】:42 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
摘要
Abstract
1 緒論
1.1 研究的背景和意義
1.1.1 木材腐朽的研究背景和意義
1.1.2 木材腐朽菌菌種鑒定的研究背景和意義
1.2 常見木材腐朽菌的分類
1.2.1 白腐菌
1.2.2 褐腐菌
1.3 木材腐朽菌的菌種鑒定方法
1.3.1 木材腐朽菌的形態(tài)學(xué)鑒定方法概述
1.3.2 基于PCR技術(shù)的木材腐朽菌分子生物學(xué)鑒定方法概述
1.4 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀
1.5 本文的主要研究?jī)?nèi)容
2 木材腐朽菌培養(yǎng)條件的優(yōu)化
2.1 兩種木材腐朽菌菌種的分離
2.2 兩種木材腐朽菌培養(yǎng)條件的優(yōu)化
2.2.1 固體培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)條件的優(yōu)化
2.2.2 液體培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)條件的優(yōu)化
2.3 本章小結(jié)
3 木材腐朽菌的形態(tài)學(xué)鑒定
3.1 真菌常用形態(tài)學(xué)鑒定方法
3.2 兩種木材腐朽菌培養(yǎng)特性的研究
3.2.1 菌落培養(yǎng)特性的研究
3.2.2 菌絲培養(yǎng)特性的研究
3.2.3 通過傳統(tǒng)方法鑒定兩種木材腐朽菌
3.3 本章小結(jié)
4 PCR技術(shù)進(jìn)行木材腐朽菌鑒定時(shí)引物的設(shè)計(jì)
4.1 PCR技術(shù)的原理
4.2 PCR技術(shù)的分類及研究現(xiàn)狀
4.2.1 巢式PCR
4.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
4.2.3 多重PCR技術(shù)
4.3 PCR反應(yīng)在木材腐朽菌鑒定中的應(yīng)用
4.4 ITS序列分析在木材腐朽菌菌種鑒定上的應(yīng)用方法
4.4.1 以ITS區(qū)段的分子量為參考進(jìn)行分子鑒定
4.4.2 以ITS區(qū)段的RFLP圖譜作為標(biāo)記特征進(jìn)行分子鑒定
4.4.3 設(shè)計(jì)專一性探針進(jìn)行分子雜交的鑒定方法
4.4.4 用特異性引物擴(kuò)增ITS區(qū)段
4.5 木材腐朽菌PCR鑒定的引物選取
4.6 本章小結(jié)
5 基于PCR技術(shù)的木材腐朽菌快速鑒定
5.1 兩種木材腐朽菌DNA的提取與純化
5.2 兩種木材腐朽菌DNA純度的檢測(cè)
5.3 PCR擴(kuò)增
5.3.1 PCR反應(yīng)參數(shù)的優(yōu)化
5.3.1.1 最適反應(yīng)循環(huán)數(shù)的選擇
5.3.1.2 熱啟動(dòng)與冷啟動(dòng)的選擇
5.3.2 兩種木材腐朽菌的PCR擴(kuò)增
5.3.3 瓊脂糖凝膠電泳反應(yīng)
5.4 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的回收與測(cè)序
5.4.1 擴(kuò)增產(chǎn)物的回收與純化
5.4.2 DNA測(cè)序
5.5 BLAST比對(duì)
5.5.1 木材腐朽菌A的分子鑒定
5.5.2 木材腐朽菌B的分子鑒定
5.6 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]基于ITS區(qū)序列的疑似野生“南華”草菇菌株的分子鑒定[J]. 劉主,蔡愛群,劉靜華,何智丹,孟曉東. 北方園藝. 2016(01)
[2]烏翅真鯊弗氏檸檬酸桿菌的分離與鑒定[J]. 盧君輝,孫佳佳,董世龍,任碩. 海洋湖沼通報(bào). 2015(04)
[3]長(zhǎng)白山野生白耙齒菌菌株ITS序列鑒定及其人工馴化栽培試驗(yàn)[J]. 于萍,隋飛飛,陳艷秋. 中國食用菌. 2015(06)
[4]毛木耳周年化栽培技術(shù)[J]. 宋泰良,黃亦英,曾國榮,賴文雙. 食用菌. 2014(06)
[5]我國第八次森林資源清查結(jié)果及分析[J]. 徐濟(jì)德. 林業(yè)經(jīng)濟(jì). 2014(03)
[6]普氏野馬物種的PCR鑒定[J]. 鄭小龍,王群,岳志芹,朱來華,梁成珠,鄧明俊,肖西志,姜帆,于業(yè)鋒. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2013(11)
[7]離褶傘屬分類學(xué)研究概況[J]. 汪小慶,周德群,張小雷,李樹紅. 中國食用菌. 2013(01)
[8]利用PCR-RFLP技術(shù)對(duì)鯽魚6個(gè)不同品系的鑒定[J]. 莊怡,劉必謙,唐杰. 生物技術(shù)通報(bào). 2012(11)
[9]采用種間特異性PCR對(duì)海參產(chǎn)品的物種鑒定研究[J]. 文菁,胡超群,張呂平,范嗣剛. 水產(chǎn)科學(xué). 2011(12)
[10]木材腐朽檢測(cè)及防治的研究進(jìn)展[J]. 王立海,孫天用. 黑龍江大學(xué)工程學(xué)報(bào). 2011(02)
碩士論文
[1]黃曲霉拮抗菌分離鑒定、培養(yǎng)條件優(yōu)化及其發(fā)酵上清液部分特性初步研究[D]. 涂彩虹.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[2]野生食用菌菌種分離與鑒定[D]. 李玉.福建農(nóng)林大學(xué) 2008
[3]靈芝菌種的分離鑒定及其幾種活性產(chǎn)物的初步研究[D]. 董元榮.南京師范大學(xué) 2006
本文編號(hào):3720964
【文章頁數(shù)】:42 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
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摘要
Abstract
1 緒論
1.1 研究的背景和意義
1.1.1 木材腐朽的研究背景和意義
1.1.2 木材腐朽菌菌種鑒定的研究背景和意義
1.2 常見木材腐朽菌的分類
1.2.1 白腐菌
1.2.2 褐腐菌
1.3 木材腐朽菌的菌種鑒定方法
1.3.1 木材腐朽菌的形態(tài)學(xué)鑒定方法概述
1.3.2 基于PCR技術(shù)的木材腐朽菌分子生物學(xué)鑒定方法概述
1.4 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀
1.5 本文的主要研究?jī)?nèi)容
2 木材腐朽菌培養(yǎng)條件的優(yōu)化
2.1 兩種木材腐朽菌菌種的分離
2.2 兩種木材腐朽菌培養(yǎng)條件的優(yōu)化
2.2.1 固體培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)條件的優(yōu)化
2.2.2 液體培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)條件的優(yōu)化
2.3 本章小結(jié)
3 木材腐朽菌的形態(tài)學(xué)鑒定
3.1 真菌常用形態(tài)學(xué)鑒定方法
3.2 兩種木材腐朽菌培養(yǎng)特性的研究
3.2.1 菌落培養(yǎng)特性的研究
3.2.2 菌絲培養(yǎng)特性的研究
3.2.3 通過傳統(tǒng)方法鑒定兩種木材腐朽菌
3.3 本章小結(jié)
4 PCR技術(shù)進(jìn)行木材腐朽菌鑒定時(shí)引物的設(shè)計(jì)
4.1 PCR技術(shù)的原理
4.2 PCR技術(shù)的分類及研究現(xiàn)狀
4.2.1 巢式PCR
4.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
4.2.3 多重PCR技術(shù)
4.3 PCR反應(yīng)在木材腐朽菌鑒定中的應(yīng)用
4.4 ITS序列分析在木材腐朽菌菌種鑒定上的應(yīng)用方法
4.4.1 以ITS區(qū)段的分子量為參考進(jìn)行分子鑒定
4.4.2 以ITS區(qū)段的RFLP圖譜作為標(biāo)記特征進(jìn)行分子鑒定
4.4.3 設(shè)計(jì)專一性探針進(jìn)行分子雜交的鑒定方法
4.4.4 用特異性引物擴(kuò)增ITS區(qū)段
4.5 木材腐朽菌PCR鑒定的引物選取
4.6 本章小結(jié)
5 基于PCR技術(shù)的木材腐朽菌快速鑒定
5.1 兩種木材腐朽菌DNA的提取與純化
5.2 兩種木材腐朽菌DNA純度的檢測(cè)
5.3 PCR擴(kuò)增
5.3.1 PCR反應(yīng)參數(shù)的優(yōu)化
5.3.1.1 最適反應(yīng)循環(huán)數(shù)的選擇
5.3.1.2 熱啟動(dòng)與冷啟動(dòng)的選擇
5.3.2 兩種木材腐朽菌的PCR擴(kuò)增
5.3.3 瓊脂糖凝膠電泳反應(yīng)
5.4 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的回收與測(cè)序
5.4.1 擴(kuò)增產(chǎn)物的回收與純化
5.4.2 DNA測(cè)序
5.5 BLAST比對(duì)
5.5.1 木材腐朽菌A的分子鑒定
5.5.2 木材腐朽菌B的分子鑒定
5.6 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]基于ITS區(qū)序列的疑似野生“南華”草菇菌株的分子鑒定[J]. 劉主,蔡愛群,劉靜華,何智丹,孟曉東. 北方園藝. 2016(01)
[2]烏翅真鯊弗氏檸檬酸桿菌的分離與鑒定[J]. 盧君輝,孫佳佳,董世龍,任碩. 海洋湖沼通報(bào). 2015(04)
[3]長(zhǎng)白山野生白耙齒菌菌株ITS序列鑒定及其人工馴化栽培試驗(yàn)[J]. 于萍,隋飛飛,陳艷秋. 中國食用菌. 2015(06)
[4]毛木耳周年化栽培技術(shù)[J]. 宋泰良,黃亦英,曾國榮,賴文雙. 食用菌. 2014(06)
[5]我國第八次森林資源清查結(jié)果及分析[J]. 徐濟(jì)德. 林業(yè)經(jīng)濟(jì). 2014(03)
[6]普氏野馬物種的PCR鑒定[J]. 鄭小龍,王群,岳志芹,朱來華,梁成珠,鄧明俊,肖西志,姜帆,于業(yè)鋒. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2013(11)
[7]離褶傘屬分類學(xué)研究概況[J]. 汪小慶,周德群,張小雷,李樹紅. 中國食用菌. 2013(01)
[8]利用PCR-RFLP技術(shù)對(duì)鯽魚6個(gè)不同品系的鑒定[J]. 莊怡,劉必謙,唐杰. 生物技術(shù)通報(bào). 2012(11)
[9]采用種間特異性PCR對(duì)海參產(chǎn)品的物種鑒定研究[J]. 文菁,胡超群,張呂平,范嗣剛. 水產(chǎn)科學(xué). 2011(12)
[10]木材腐朽檢測(cè)及防治的研究進(jìn)展[J]. 王立海,孫天用. 黑龍江大學(xué)工程學(xué)報(bào). 2011(02)
碩士論文
[1]黃曲霉拮抗菌分離鑒定、培養(yǎng)條件優(yōu)化及其發(fā)酵上清液部分特性初步研究[D]. 涂彩虹.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[2]野生食用菌菌種分離與鑒定[D]. 李玉.福建農(nóng)林大學(xué) 2008
[3]靈芝菌種的分離鑒定及其幾種活性產(chǎn)物的初步研究[D]. 董元榮.南京師范大學(xué) 2006
本文編號(hào):3720964
本文鏈接:http://sikaile.net/nykjlw/lylw/3720964.html
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