EIN3是乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑上一個重要的轉(zhuǎn)錄因子,該基因的表達能夠啟動一系列調(diào)節(jié)乙烯的目標基因的表達,對乙烯反應(yīng)起正調(diào)控作用,同時還可以通過乙烯信號與其他信號的交叉反應(yīng)影響植物多種生理生化過程。為了揭示白樺轉(zhuǎn)BpEIN3基因功能,本實驗研究以白樺（Betula platyphylla）為遺傳轉(zhuǎn)化受體,進行白樺BpEIN3基因的表達特性分析,同時構(gòu)建BpEIN3過表達、抑制表達載體并轉(zhuǎn)化白樺,獲得BpEIN3轉(zhuǎn)基因株系,闡述該基因的功能,為后續(xù)揭示BpEIN3基因調(diào)控白樺葉片衰老及細胞程序化死亡分子機理提供參考。研究結(jié)果如下:BpEIN3基因表達特性研究表明,用先前已獲得的PromEIN3::CUS白樺株系為材料,PCR檢測結(jié)果為陽性;對獲得的轉(zhuǎn)PromEIN3::GUS株系進行ET、IAA、MeJA、SA、GA激素進行不同時間處理,以處理后的轉(zhuǎn)基因株系為材料,進行GUS表達量分析及其活性的測定,結(jié)果表明,在不同激素處理下,轉(zhuǎn)PromEIN3::GUS白樺株系GUS的表達量及活性均有不同程度的上升,說明BpEIN3基因?qū)Σ煌募に鼐许憫?yīng),且響應(yīng)效果不一致。實驗采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法開展轉(zhuǎn)BpE... 

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 EIN3基因功能及研究進展
        1.1.1 EIN3是乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑上重要的轉(zhuǎn)錄因子
        1.1.2 EIN3是乙烯與其他激素交叉對話的重要節(jié)點
    1.2 植物類病斑的產(chǎn)生及特征
        1.2.1 植物葉片類病斑產(chǎn)生因素
        1.2.2 植物類病斑突變體的激素信號途徑
    1.3 植物葉片衰老的產(chǎn)生及特征
        1.3.1 影響植物葉片衰老的外部因素
        1.3.2 影響植物葉片衰老的內(nèi)部因素
    1.4 研究的目的意義
    1.5 技術(shù)路線
2 BpEIN3基因表達特性分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 實驗試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 Prom_(EIN3)::GUS白樺的PCR檢測
        2.2.2 轉(zhuǎn)Prom_(EIN3)::GUS白樺的激素處理
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 轉(zhuǎn)Prom_(EIN3)::GUS白樺的獲得
        2.3.2 Bp_(EIN3)基因?qū)に氐膽?yīng)答特性
    2.4 本章小節(jié)
3 白樺BpEIN3基因的遺傳轉(zhuǎn)化
    3.1 實驗材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 載體與菌株
        3.1.3 酶及試劑
    3.2 實驗方法
        3.2.1 BpEIN3基因的獲得及生物信息學(xué)分析
        3.2.2 BpEIN3基因的克隆及超表達載體構(gòu)建
        3.2.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)白樺合子胚遺傳轉(zhuǎn)化
        3.2.4 轉(zhuǎn)基因植株的分子檢測
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 BpEIN3基因的生物信息學(xué)分析
        3.3.2 35::BpEIN3表達載體的獲得
        3.3.3 轉(zhuǎn)基因白樺的獲得
        3.3.4 轉(zhuǎn)基因植株的分子檢測
    3.4 本章小結(jié)
4 白樺BpEIN3抑制表達株系出現(xiàn)類病斑早衰
    4.1 實驗材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 實驗試劑
        4.1.3 實驗儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 抑制表達株系葉片類病斑觀察
        4.2.2 抑制表達株系光合、葉綠素?zé)晒鈪?shù)測定及生長調(diào)查
        4.2.3 組織化學(xué)法檢測抑制表達株系葉片中的H_2O_2和O_2
        4.2.4 抑制表達株系葉片中SOD、POD、CAT酶活測定
        4.2.5 抑制表達株系葉片ABA、JA、SA含量的測定
        4.2.6 抑制表達株系葉片抗葉枯病檢測
        4.2.7 抑制表達株系相關(guān)基因的qRT-PCR分析
    4.3 數(shù)據(jù)處理
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 BpEIN3抑制表達白樺葉片類病斑的出現(xiàn)
        4.4.2 BpEIN3抑制表達株系生長及光合參數(shù)比較
        4.4.3 BpEIN3抑制表達株系葉片中H_2O_2及O_(2-)的積累
        4.4.4 BpEIN3抑制表達株系葉片中主要抗氧化酶含量比較
        4.4.5 BpEIN3抑制表達株系葉片主要內(nèi)源激素的測定
        4.4.6 BpEIN3抑制表達株系抗葉枯病能力的提高
        4.4.7 BpEIN3抑制表達株系葉片不同發(fā)育時期相關(guān)基因表達特性分析
    4.5 本章小結(jié)
5 結(jié)論與討論
    5.1 結(jié)論
    5.2 討論
        5.2.1 BpEIN3基因表達特性分析
        5.2.2 植物類病斑引發(fā)葉片早衰
        5.2.3 植物葉片早衰伴隨葉片激素含量改變及上調(diào)衰老相關(guān)基因
        5.2.4 EIN3參與調(diào)控葉片早衰形成類病斑
參考文獻
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]水稻衰老相關(guān)突變體的研究進展[J]. 王鵬杰,吳殿星,舒小麗.  核農(nóng)學(xué)報. 2018(03)
[2]植物類病變突變體研究進展[J]. 肖桂青,張元夫,楊必能,劉步蟾,周嘉豪,張海文.  分子植物育種. 2017(01)
[3]乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與植物非生物脅迫反應(yīng)調(diào)控研究進展[J]. 趙赫,陳受宜,張勁松.  生物技術(shù)通報. 2016(10)
[4]植物類病變突變體及其信號傳導(dǎo)途徑[J]. 劉林,張迎信,劉群恩,李枝,曹立勇.  核農(nóng)學(xué)報. 2014(10)
[5]植物激素在葉片衰老中的作用機制研究進展[J]. 張艷軍,趙江哲,張可偉.  植物生理學(xué)報. 2014(09)
[6]植物類病變壞死突變體研究進展[J]. 虞玲錦,張國良.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(02)
[7]水稻黃葉突變體功能葉衰老生理特性的研究[J]. 武立權(quán),柯建,尤翠翠,何清華,王士梅,王榮富.  核農(nóng)學(xué)報. 2013(11)
[8]植物激素乙烯作用機制的最新進展[J]. 李文陽,馬夢迪,郭紅衛(wèi).  中國科學(xué):生命科學(xué). 2013(10)
[9]作物葉片衰老研究進展[J]. 孫玉瑩,畢京翠,趙志超,程治軍,萬建民.  作物雜志. 2013(04)
[10]乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究[J]. 張存立,郭紅衛(wèi).  自然雜志. 2012(04)



本文編號：3714604