植物受到干旱、鹽脅迫后,體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生一系列的生理生化變化,包括重建細(xì)胞的離子平衡、修復(fù)機(jī)體傷害、協(xié)調(diào)生長(zhǎng)調(diào)控等,在這個(gè)過(guò)程中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子、轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮著重要作用。它們能夠接受信號(hào)并傳遞給下游轉(zhuǎn)錄因子來(lái)調(diào)控基因的表達(dá)。WOX轉(zhuǎn)錄因子家族是植物特有的轉(zhuǎn)錄因子,在生長(zhǎng)發(fā)育的過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用,如植物形態(tài)建成、干細(xì)胞分裂和分化的維持以及不定根形成和伸長(zhǎng)等。多年生木本植物,具有獨(dú)特的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程,且需要長(zhǎng)期應(yīng)對(duì)非生物脅迫環(huán)境,但WOX家族在脅迫應(yīng)答中的作用研究甚少。本文研究了毛白楊（Populus tomentosa Carr.）PtoWOX11/12a基因在鹽、干旱脅迫下的表達(dá)模式,通過(guò)酵母單雜交文庫(kù)篩選獲得了一個(gè)PtoWOX11/12a基因的上游調(diào)控因子PtoAP2,可能是接受環(huán)境脅迫反應(yīng)的一條途徑。與對(duì)照相比,過(guò)表達(dá)PtoWOX11/12a轉(zhuǎn)基因楊樹(shù)擁有龐大的根系,進(jìn)而提高楊樹(shù)的耐鹽、抗旱能力。主要的研究結(jié)果如下:1.qRT-PCR分析結(jié)果顯示,鹽、干旱脅迫處理下,PtoWOX11/12a基因在毛白楊組培苗的根和葉中表達(dá)量顯著上調(diào)。同樣,ProPtoWOX11/12a::GUS轉(zhuǎn)基因楊樹(shù)... 

【文章頁(yè)數(shù)】：108 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 引言
        1.1.0 植物對(duì)脅迫的響應(yīng)
        1.1.1 植物轉(zhuǎn)錄因子
        1.1.2 植物參與非生物脅迫的轉(zhuǎn)錄因子
        1.1.3 植物WOX轉(zhuǎn)錄因子研究進(jìn)展
            1.1.3.1 植物WOX轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)
            1.1.3.2 植物WOX轉(zhuǎn)錄因子的功能研究
            1.1.3.3 植物WOX轉(zhuǎn)錄因子與基因的互作
            1.1.3.3 植物WOX轉(zhuǎn)錄因子抗逆研究
        1.1.4 植物根系與抗逆脅迫的關(guān)系
    1.2 問(wèn)題的提出、擬解決的問(wèn)題
    1.3 研究的目的、意義以及主要內(nèi)容
        1.3.1 研究的目的、意義
        1.3.2 研究的主要內(nèi)容
    1.4 技術(shù)路線(xiàn)圖
第二章 毛白楊PtoWOX11/12a基因序列和表達(dá)模式分析
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料及生長(zhǎng)條件
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 溶液配制
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 毛白楊PtoWOX11/12a基因生物信息學(xué)分析
        2.2.2 毛白楊PtoWOX11/12a基因逆境下的表達(dá)模式分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 毛白楊PtoWOX11/12a序列分析
        2.3.2 毛白楊PtoWOX11/12a基因啟動(dòng)子序列分析
        2.3.3 毛白楊PtoWOX11/12a基因?qū)}、干旱脅迫的響應(yīng)
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 毛白楊PtoWOX11/12a轉(zhuǎn)錄激活研究
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 菌種與載體
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要培養(yǎng)基
        3.1.4 溶液配制
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 酵母表達(dá)載體pGBKT7-PtoWOX11/12a N1-N2的構(gòu)建
        3.2.2 酵母Y2HGold感受態(tài)細(xì)胞的制備以及轉(zhuǎn)化
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 酵母表達(dá)載體pGBKT7-PtoWOX11/12a N1-N2的獲得
        3.3.2 PtoWOX11/12a蛋白轉(zhuǎn)錄激活區(qū)位于C端
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 毛白楊PtoWOX11/12a基因上游調(diào)控因子研究
    4.1 試驗(yàn)材料
        4.1.1 植物材料及生長(zhǎng)條件
        4.1.2 菌種與載體
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 溶液配制
        4.1.5 溶液配制
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 酵母cDNA文庫(kù)的構(gòu)建
        4.2.2 酵母重組報(bào)告載體pHIS2-DRE的構(gòu)建
        4.2.3 pHIS2-DRE報(bào)告載體的 3-AT濃度確定
        4.2.4 酵母cDNA文庫(kù)的篩選
        4.2.5 酵母單雜交確定PtoWOX11/12a基因上游調(diào)控因子
        4.2.6 瞬時(shí)轉(zhuǎn)化原生質(zhì)體驗(yàn)證PtoWOX11/12a基因上游調(diào)控因子
        4.2.7 PtoWOX11/12a基因上游調(diào)控因子的表達(dá)模式分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 酵母文庫(kù)的構(gòu)建
        4.3.2 pHIS2-DRE報(bào)告載體的獲得
        4.3.3 pHIS2-DRE報(bào)告載體 3-AT濃度選擇
        4.3.4 陽(yáng)性克隆的互作分析
        4.3.5 瞬時(shí)轉(zhuǎn)化原生質(zhì)體分析PtoWOX11/12a基因上游調(diào)控因子
        4.3.6 PtoWOX11/12a與PtoAP2的共表達(dá)分析
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第五章 轉(zhuǎn)基因PtoWOX11/12a楊樹(shù)非生物脅迫研究
    5.1 試驗(yàn)材料
        5.1.1 植物材料及生長(zhǎng)條件
        5.1.2 菌種與載體
        5.1.3 主要試劑
        5.1.4 主要培養(yǎng)基
        5.1.5 溶液配制
    5.2 試驗(yàn)方法
        5.2.1 抑制表達(dá)PtoWOX11/12a轉(zhuǎn)基因材料制備
        5.2.2 PtoWOX11/12a對(duì)楊樹(shù)扦插苗生長(zhǎng)發(fā)育的影響
        5.2.3 PtoWOX11/12a在定根誘導(dǎo)過(guò)程中基因表達(dá)量分析
        5.2.4 轉(zhuǎn)基因PtoWOX11/12a抗逆功能分析
        5.2.5 嫁接實(shí)驗(yàn)
        5.2.6 數(shù)據(jù)分析
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 顯性抑制PtoWOX11/12a轉(zhuǎn)基因材料的獲得
        5.3.2 PtoWOX11/12a基因?qū)顦?shù)扦插苗生長(zhǎng)發(fā)育的影響
        5.3.3 過(guò)表達(dá)PtoWOX11/12a增強(qiáng)轉(zhuǎn)基因楊樹(shù)耐鹽、抗旱能力
        5.3.4 嫁接實(shí)驗(yàn)分析
        5.3.5 過(guò)表達(dá)PtoWOX11/12a轉(zhuǎn)基因楊樹(shù)降低ROS含量和細(xì)胞膜損傷
        5.3.6 過(guò)表達(dá)PtoWOX11/12a轉(zhuǎn)基因楊樹(shù)提高保護(hù)性酶活
        5.3.7 過(guò)表達(dá)PtoWOX11/12a轉(zhuǎn)基因楊樹(shù)提高輔氨酸和可溶性蛋白含量
        5.3.8 過(guò)表達(dá)PtoWOX11/12a轉(zhuǎn)基因楊樹(shù)提高凈光合速率和降低了MDA含量
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
第六章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
在讀期間的學(xué)術(shù)研究
致謝



本文編號(hào)：3685939