發(fā)布時(shí)間：2022-10-04 23:12

　　植物受到干旱、鹽脅迫后,體內(nèi)會產(chǎn)生一系列的生理生化變化,包括重建細(xì)胞的離子平衡、修復(fù)機(jī)體傷害、協(xié)調(diào)生長調(diào)控等,在這個(gè)過程中信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子、轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮著重要作用。它們能夠接受信號并傳遞給下游轉(zhuǎn)錄因子來調(diào)控基因的表達(dá)。WOX轉(zhuǎn)錄因子家族是植物特有的轉(zhuǎn)錄因子,在生長發(fā)育的過程中發(fā)揮著重要的作用,如植物形態(tài)建成、干細(xì)胞分裂和分化的維持以及不定根形成和伸長等。多年生木本植物,具有獨(dú)特的生長發(fā)育過程,且需要長期應(yīng)對非生物脅迫環(huán)境,但WOX家族在脅迫應(yīng)答中的作用研究甚少。本文研究了毛白楊（Populus tomentosa Carr.）PtoWOX11/12a基因在鹽、干旱脅迫下的表達(dá)模式,通過酵母單雜交文庫篩選獲得了一個(gè)PtoWOX11/12a基因的上游調(diào)控因子PtoAP2,可能是接受環(huán)境脅迫反應(yīng)的一條途徑。與對照相比,過表達(dá)PtoWOX11/12a轉(zhuǎn)基因楊樹擁有龐大的根系,進(jìn)而提高楊樹的耐鹽、抗旱能力。主要的研究結(jié)果如下:1.qRT-PCR分析結(jié)果顯示,鹽、干旱脅迫處理下,PtoWOX11/12a基因在毛白楊組培苗的根和葉中表達(dá)量顯著上調(diào)。同樣,ProPtoWOX11/12a::GUS轉(zhuǎn)基因楊樹... 

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 引言
        1.1.0 植物對脅迫的響應(yīng)
        1.1.1 植物轉(zhuǎn)錄因子
        1.1.2 植物參與非生物脅迫的轉(zhuǎn)錄因子
        1.1.3 植物WOX轉(zhuǎn)錄因子研究進(jìn)展
            1.1.3.1 植物WOX轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)
            1.1.3.2 植物WOX轉(zhuǎn)錄因子的功能研究
            1.1.3.3 植物WOX轉(zhuǎn)錄因子與基因的互作
            1.1.3.3 植物WOX轉(zhuǎn)錄因子抗逆研究
        1.1.4 植物根系與抗逆脅迫的關(guān)系
    1.2 問題的提出、擬解決的問題
    1.3 研究的目的、意義以及主要內(nèi)容
        1.3.1 研究的目的、意義
        1.3.2 研究的主要內(nèi)容
    1.4 技術(shù)路線圖
第二章 毛白楊PtoWOX11/12a基因序列和表達(dá)模式分析
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料及生長條件
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 溶液配制
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 毛白楊PtoWOX11/12a基因生物信息學(xué)分析
        2.2.2 毛白楊PtoWOX11/12a基因逆境下的表達(dá)模式分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 毛白楊PtoWOX11/12a序列分析
        2.3.2 毛白楊PtoWOX11/12a基因啟動子序列分析
        2.3.3 毛白楊PtoWOX11/12a基因?qū)}、干旱脅迫的響應(yīng)
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 毛白楊PtoWOX11/12a轉(zhuǎn)錄激活研究
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 菌種與載體
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要培養(yǎng)基
        3.1.4 溶液配制
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 酵母表達(dá)載體pGBKT7-PtoWOX11/12a N1-N2的構(gòu)建
        3.2.2 酵母Y2HGold感受態(tài)細(xì)胞的制備以及轉(zhuǎn)化
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 酵母表達(dá)載體pGBKT7-PtoWOX11/12a N1-N2的獲得
        3.3.2 PtoWOX11/12a蛋白轉(zhuǎn)錄激活區(qū)位于C端
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 毛白楊PtoWOX11/12a基因上游調(diào)控因子研究
    4.1 試驗(yàn)材料
        4.1.1 植物材料及生長條件
        4.1.2 菌種與載體
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 溶液配制
        4.1.5 溶液配制
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 酵母cDNA文庫的構(gòu)建
        4.2.2 酵母重組報(bào)告載體pHIS2-DRE的構(gòu)建
        4.2.3 pHIS2-DRE報(bào)告載體的 3-AT濃度確定
        4.2.4 酵母cDNA文庫的篩選
        4.2.5 酵母單雜交確定PtoWOX11/12a基因上游調(diào)控因子
        4.2.6 瞬時(shí)轉(zhuǎn)化原生質(zhì)體驗(yàn)證PtoWOX11/12a基因上游調(diào)控因子
        4.2.7 PtoWOX11/12a基因上游調(diào)控因子的表達(dá)模式分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 酵母文庫的構(gòu)建
        4.3.2 pHIS2-DRE報(bào)告載體的獲得
        4.3.3 pHIS2-DRE報(bào)告載體 3-AT濃度選擇
        4.3.4 陽性克隆的互作分析
        4.3.5 瞬時(shí)轉(zhuǎn)化原生質(zhì)體分析PtoWOX11/12a基因上游調(diào)控因子
        4.3.6 PtoWOX11/12a與PtoAP2的共表達(dá)分析
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第五章 轉(zhuǎn)基因PtoWOX11/12a楊樹非生物脅迫研究
    5.1 試驗(yàn)材料
        5.1.1 植物材料及生長條件
        5.1.2 菌種與載體
        5.1.3 主要試劑
        5.1.4 主要培養(yǎng)基
        5.1.5 溶液配制
    5.2 試驗(yàn)方法
        5.2.1 抑制表達(dá)PtoWOX11/12a轉(zhuǎn)基因材料制備
        5.2.2 PtoWOX11/12a對楊樹扦插苗生長發(fā)育的影響
        5.2.3 PtoWOX11/12a在定根誘導(dǎo)過程中基因表達(dá)量分析
        5.2.4 轉(zhuǎn)基因PtoWOX11/12a抗逆功能分析
        5.2.5 嫁接實(shí)驗(yàn)
        5.2.6 數(shù)據(jù)分析
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 顯性抑制PtoWOX11/12a轉(zhuǎn)基因材料的獲得
        5.3.2 PtoWOX11/12a基因?qū)顦淝げ迕缟L發(fā)育的影響
        5.3.3 過表達(dá)PtoWOX11/12a增強(qiáng)轉(zhuǎn)基因楊樹耐鹽、抗旱能力
        5.3.4 嫁接實(shí)驗(yàn)分析
        5.3.5 過表達(dá)PtoWOX11/12a轉(zhuǎn)基因楊樹降低ROS含量和細(xì)胞膜損傷
        5.3.6 過表達(dá)PtoWOX11/12a轉(zhuǎn)基因楊樹提高保護(hù)性酶活
        5.3.7 過表達(dá)PtoWOX11/12a轉(zhuǎn)基因楊樹提高輔氨酸和可溶性蛋白含量
        5.3.8 過表達(dá)PtoWOX11/12a轉(zhuǎn)基因楊樹提高凈光合速率和降低了MDA含量
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
第六章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
在讀期間的學(xué)術(shù)研究
致謝



本文編號：3685939