本研究以水曲柳為材料,克隆15個(gè)水曲柳4CL基因,分別命名為Fm4CL1-Fm4CL15,已上傳至NCBI并獲得登錄號(hào)。對(duì)15個(gè)水曲柳Fm4CL基因進(jìn)行了生物信息學(xué)及表達(dá)模式分析。構(gòu)建了植物表達(dá)載體pBI121-Fm4CL2和pBI121-Fm4CL4,并成功轉(zhuǎn)化煙草,獲得轉(zhuǎn)基因植株。測(cè)定轉(zhuǎn)基因煙草中木質(zhì)素、纖維素和半纖維素的含量及木質(zhì)素合成途徑相關(guān)酶PAL和POD的含量。并通過顯微切片觀察對(duì)比分析了轉(zhuǎn)基因與非轉(zhuǎn)基因煙草木質(zhì)部細(xì)胞大小及形態(tài)差異。初步揭示了水曲柳Fm4CL的表達(dá)模式及功能。主要研究結(jié)果如下:1、水曲柳Fm4CL基因生物信息學(xué)分析本研究對(duì)15個(gè)Fm4CL全長(zhǎng)基因進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。利用在線分析軟件分析了理化性質(zhì),并對(duì)其蛋白結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析。結(jié)果表明,Fm4CL2、Fm4CL3、Fm4CL6、Fm4CL10、Fm4CL14 為不穩(wěn)定蛋白,其余為穩(wěn)定蛋白。Fm4CL1、Fm4CL3、Fm4CL4、Fm4CL7、Fm4CL8、Fm4CL10為親水性蛋白,其余為疏水性蛋白。全部的Fm4CL蛋白有跨膜結(jié)構(gòu)域,說明Fm4CL蛋白具有跨膜能力。全部的Fm4CL蛋白都是由α螺旋、延伸鏈、... 

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 木質(zhì)素簡(jiǎn)介
        1.1.1 木質(zhì)素結(jié)構(gòu)特征
        1.1.2 木質(zhì)素生物合成途徑
    1.2 4-香豆酸輔酶A鏈接酶(4CL)簡(jiǎn)介
        1.2.1 4-香豆酸輔酶A鏈接酶(4CL)基因研究進(jìn)展
        1.2.2 4-香豆酸輔酶A鏈接酶(4CL)分類
    1.3 應(yīng)拉木及水曲柳簡(jiǎn)介
        1.3.1 應(yīng)拉木簡(jiǎn)介
        1.3.2 應(yīng)拉木的研究進(jìn)展
        1.3.3 水曲柳簡(jiǎn)介
    1.4 本研究的目的和意義
2 水曲柳Fm4CL基因生物信息學(xué)及表達(dá)模式分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 主要試劑及藥品
        2.1.3 水曲柳應(yīng)拉處理
        2.1.4 水曲柳Fm4CL生物信息學(xué)分析
        2.1.5 水曲柳總RNA的提取(Tris-CTAB法)
        2.1.6 消化
        2.1.7 RNA濃度的測(cè)定
        2.1.8 反轉(zhuǎn)錄
        2.1.9 PCR
        2.1.10 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 Fm4CL生物信息學(xué)分析
        2.2.2 Fm4CL表達(dá)模式分析
    2.3 討論
    2.4 本章小結(jié)
3 水曲柳Fm4CL基因的表達(dá)載體的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化
    3.1 材料與方法
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌種與載體
        3.1.3 主要試劑及藥品
        3.1.4 水曲柳Fm4CL2、Fm4CL4全長(zhǎng)基因的獲得
        3.1.5 目的基因與pMD18-T載體的連接及轉(zhuǎn)化
        3.1.6 大腸桿菌質(zhì)粒的提取
        3.1.7 表達(dá)載體pBI121-Fm4CL2/Fm4CL4的構(gòu)建
        3.1.8 三親雜交法轉(zhuǎn)化根瘤農(nóng)桿菌
        3.1.9 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草遺傳轉(zhuǎn)化
        3.1.10 轉(zhuǎn)基因煙草DNA的提取
        3.1.11 轉(zhuǎn)基因煙草的分子鑒定
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 植物表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
        3.2.2 轉(zhuǎn)基因煙草的轉(zhuǎn)化
        3.2.3 轉(zhuǎn)基因煙草DNA和RNA提取結(jié)果
        3.2.4 轉(zhuǎn)基因煙草分子鑒定
    3.3 討論
    3.4 本章小結(jié)
4 轉(zhuǎn)基因煙草的鑒定及基因功能分析
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 轉(zhuǎn)基因煙草的移栽
        4.1.3 轉(zhuǎn)基因煙草GUS檢測(cè)
        4.1.4 轉(zhuǎn)基因煙草木質(zhì)素、纖維素和半纖維素的測(cè)定
        4.1.5 轉(zhuǎn)基因煙草PAL和POD酶活性的測(cè)定
        4.1.6 轉(zhuǎn)基因煙草永久石蠟切片的制備
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 轉(zhuǎn)基因煙草的移栽
        4.2.2 轉(zhuǎn)基因煙草的GUS染色
        4.2.3 轉(zhuǎn)基因煙草木質(zhì)素、纖維素和半纖維素的測(cè)定結(jié)果
        4.2.4 轉(zhuǎn)基因煙草PAL和POD酶活性的測(cè)定結(jié)果
        4.2.5 轉(zhuǎn)基因煙草切片觀察結(jié)果
    4.3 討論
    4.4 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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