白花泡桐是我國特有的速生豐產(chǎn)樹種,具有非常高的經(jīng)濟和生態(tài)價值。利用基因工程技術(shù)對白花泡桐進行品種改良,可以彌補常規(guī)育種方法的不足,加快白花泡桐在遺傳育種方向的發(fā)展。在白花泡桐的生長過程中,干旱、鹽害、極端溫度等環(huán)境脅迫因子能夠嚴重影響其生理活動以及生長發(fā)育。植物通過轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控相關(guān)基因表達,可以在轉(zhuǎn)錄水平上對自身生理代謝和生長發(fā)育達到調(diào)節(jié)作用。DREB轉(zhuǎn)錄因子在植物中廣泛存在,通過參與調(diào)控各種功能基因的表達,來提高植物的抗逆性。本研究在白花泡桐中克隆到白花泡桐的Pf DREB2基因,并對其進行了生物信息學(xué)分析,該基因具有DREB基因的基本特性。主要研究結(jié)果如下:1、本實驗材料為白花泡桐葉片,根據(jù)DREB基因DNA結(jié)合域的保守區(qū)域設(shè)計并合成簡并引物,擴增出DREB基因的同源片段,根據(jù)此同源片段設(shè)計特異性引物,通過RACE技術(shù)獲得白花泡桐DREB基因全長序列,通過氨基酸序列比對發(fā)現(xiàn),此基因為DREB2轉(zhuǎn)錄因子基因。2、分別以白花泡桐genomic DNA和c DNA為模板PCR擴增,通過對擴增的產(chǎn)物的序列分析發(fā)現(xiàn),該基因不含有內(nèi)含子。3、該基因c DNA序列全長1049bp,其完整的開放閱... 

【文章來源】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
英漢縮略詞對照
1 文獻綜述
    1.1 植物抗逆分子機制
        1.1.1 在逆境脅迫中直接發(fā)揮功能的蛋白
            1.1.1.1 LEA蛋白
            1.1.1.2 水通道蛋白
            1.1.1.3 Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運蛋白
        1.1.2 滲透調(diào)節(jié)因子
            1.1.2.1 脯氨酸
            1.1.2.2 甜菜堿
        1.1.3 抗氧化防御相關(guān)酶
            1.1.3.1 POD
            1.1.3.2 SOD
        1.1.4 感應(yīng)傳導(dǎo)脅迫信號、調(diào)控基因表達相關(guān)基因
    1.2 植物抗逆相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子
        1.2.1 bZIP轉(zhuǎn)錄因子
        1.2.2 MYB轉(zhuǎn)錄因子
        1.2.3 WRKY轉(zhuǎn)錄因子
        1.2.4 AP2/EREBP轉(zhuǎn)錄因子
    1.3 DREB轉(zhuǎn)錄因子
        1.3.1 DREB轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)特點
        1.3.2 DREB轉(zhuǎn)錄因子的表達調(diào)控
        1.3.3 DREB基因在植物抗逆基因工程中的作用
    1.4 實時熒光定量PCR的應(yīng)用
    1.5 白花泡桐概述
2 引言
3 材料與方法
    3.1 實驗材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 實驗主要試劑和試劑盒
        3.1.3 實驗主要儀器
        3.1.4 常用溶液配方
    3.2 實驗方法
        3.2.1 植物材料培養(yǎng)及脅迫處理
            3.2.1.1 材料的培養(yǎng)和實驗取樣
            3.2.1.2 幼苗的脅迫處理
        3.2.2 白花泡桐DNA的提取(CTAB法)和檢測
            3.2.2.1 白花泡桐DNA的提取
            3.2.2.2 白花泡桐DNA的檢測
        3.2.3 白花泡桐RNA的提取和檢測
            3.2.3.1 白花泡桐RNA的提取
            3.2.3.2 白花泡桐RNA的檢測
        3.2.4 第一鏈cDNA的合成
        3.2.5 泡桐DREB基因保守序列的獲得
            3.2.5.1 設(shè)計合成引物
            3.2.5.2 PCR擴增
        3.2.6 利用3'RACE、5'RACE克隆已知保守序列的3'端、5'端序列
            3.2.6.1 巢式PCR擴增3'端序列
            3.2.6.2 巢式PCR擴增5'端序列
        3.2.7 白花泡桐DREB基因全長序列的獲得
        3.2.8 不同脅迫處理下白花泡桐DREB基因的表達分析
            3.2.8.1 實時熒光定量PCR相關(guān)引物設(shè)計
            3.2.8.2 引物的特異性檢測
            3.2.8.3 檢測引物二聚體
            3.2.8.4 繪制梯度稀釋標準曲線DNA模板的制備
            3.2.8.5 不同逆境條件下目的基因表達的實時熒光定量分析
4 結(jié)果與分析
    4.1 白花泡桐DREB基因序列的獲得
        4.1.1 白花泡桐基因組DNA、RNA檢測
        4.1.2 白花泡桐DREB保守序列的獲得
        4.1.3 DREB基因3,端、5,端序列的獲得
        4.1.4 DREB基因全長序列
    4.2 白花泡桐DREB基因生物信息學(xué)分析
    4.3 不同脅迫處理下白花泡桐DREB基因的表達分析
        4.3.1 引物的特異性檢測
        4.3.2 引物二聚體檢測
        4.3.3 不同脅迫下目的基因表達的實時熒光定量分析結(jié)果
5 結(jié)論與討論
    5.1 白花泡桐DREB基因的克隆
    5.2 白花泡桐DREB基因全長序列的分析
    5.3 白花泡桐DREB基因的不同脅迫條件下表達分析
參考文獻
ABSTRACT



本文編號：3634200