發(fā)布時間：2022-01-19 05:48

　　氮素營養(yǎng)對于林木的生長至關重要,是有機體最主要的組成物質(zhì)之一,因此土壤中的氮素營養(yǎng)也成為林木生長發(fā)育的主要限制因素之一。同時由于糧食安全對國家繁榮與穩(wěn)定具有舉足輕重的地位,因此肥力較好的土壤一般用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn),營造人工林往往選擇肥力相對較弱的區(qū)域,另外人工林也無法像農(nóng)作物一樣,進行定期施肥,因此提高林木在貧瘠土壤中的氮素吸收與利用效率,對促進林木在貧瘠土壤上的生長具有重要意義。AMT是植物體內(nèi)銨吸收和轉(zhuǎn)移的重要的轉(zhuǎn)運子,主要從事根部對于環(huán)境中銨的吸收和轉(zhuǎn)運以及地上部分銨的重吸收。本試驗對毛果楊銨轉(zhuǎn)運蛋白家族成員PtrAkT1;6基因進行了表達模式、功能鑒定和遺傳轉(zhuǎn)化等研究,結果如下：（1）熒光定量PCR結果顯示：PtrAMT1;6基因偏好在葉片中表達,并且在成熟葉片中的表達顯著高于幼嫩葉片；對毛果楊PtrAMT1;6基因進行光周期定量,結果顯示,PtrAMT1;6基因具有黑暗誘導和光抑制的表達模式：（2）酵母銨轉(zhuǎn)運蛋白突變體31019b突變體功能恢復試驗結果表明,PtrAMT1;6基因恢復了突變體高親和力銨轉(zhuǎn)運的能力；（3）用pCAMBIA-PtrAMT1;6P轉(zhuǎn)化擬南芥,并對轉(zhuǎn)化系進行... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 植物與氮素營養(yǎng)
    1.2 楊樹與氮素營養(yǎng)
        1.2.1 楊樹的社會經(jīng)濟價值
        1.2.2 氮素營養(yǎng)與楊樹生長發(fā)育
    1.3 植物對于氮素營養(yǎng)的吸收和同化
        1.3.1 植物對于氮素營養(yǎng)的吸收
        1.3.2 硝酸根轉(zhuǎn)運蛋白(NRT)
        1.3.3 銨轉(zhuǎn)運蛋白(AMT)
        1.3.4 GS/GOGAT途徑
    1.4 地上部分銨的再利用
    1.5 研究的目的和意義
2 毛果楊銨轉(zhuǎn)運蛋白PtrAMT1；6的表達模式
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 試劑及器材
    2.2 實驗方法
        2.2.1 材料處理
        2.2.2 RNA的提取
        2.2.3 cDNA制備
        2.2.4 實時定量PCR
    2.3 實驗結果
        2.3.1 RNA提取結果
        2.3.2 熒光定量PCR結果
    2.4 本章小結
3 酵母銨轉(zhuǎn)運蛋白突變體的功能恢復
    3.1 材料
        3.1.1 載體和菌種
        3.1.2 試驗所用的試劑
        3.1.3 酵母培養(yǎng)配制
        3.1.4 試劑和器材
    3.2 實驗方法
        3.2.1 基因序列分析
        3.2.2 酵母表達載體pYES2-PtrAMT1；6構建
        3.2.3 酵母感受態(tài)的制備和轉(zhuǎn)化
        3.2.4 酵母功能互補
    3.3 實驗結果
        3.3.1 毛果楊和番茄AMT1家族蛋白N端序列多重比對
        3.3.2 跨膜結構域預測
        3.3.3 基因克隆及酵母表達載體pYES2-PtrAMT1；6載體構建
        3.3.4 酵母功能互補
    3.4 本章小結
4 PtrAMT1；6P：：GUS構建以及在擬南芥中的表達
    4.1 材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 載體和菌種
        4.1.3 試劑和器材
    4.2 實驗方法
        4.2.1 啟動子元件分析
        4.2.2 毛果楊基因組DNA的提取
        4.2.3 毛果楊PtrAMT1；6啟動子克隆和表達載體構建
        4.2.4 農(nóng)桿菌感受態(tài)的制備及轉(zhuǎn)化
        4.2.5 擬南芥種子表面消毒、萌發(fā)和幼苗移栽
        4.2.6 擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化和純合轉(zhuǎn)化系的篩選
        4.2.7 GUS染色
    4.3 實驗結果
        4.3.1 啟動子元件分析
        4.3.2 毛果楊PtrAMT1；6啟動子克隆
        4.3.3 PtrAMT1；6P：：GUS在擬南芥中的表達
    4.4 本章小結
5 PtrAMT1；6在擬南芥中過表達
    5.1 材料
        5.1.1 植物材料
        5.1.2 載體和菌種
        5.1.3 培養(yǎng)基配制
        5.1.4 實驗所用試劑
    5.2 實驗方法
        5.2.1 pROKE2-PtrAMT1；6表達載體的構建和農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
        5.2.2 擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化和純合系篩選和鑒定
        5.2.3 擬南芥過表達轉(zhuǎn)化株系在不同營養(yǎng)培養(yǎng)基上豎直生長
    5.3 實驗結果
        5.3.1 載體pROKE2-PtrAMT1；6構建
        5.3.2 PtrAMT1；6基因擬南芥純合系PCR鑒定
        5.3.3 轉(zhuǎn)化系過表達定量檢測
        5.3.4 擬南芥不同氮素處理試驗
    5.4 本章小結
6 84K楊PtrAMT1；6基因遺傳轉(zhuǎn)化
    6.1 材料
        6.1.1 植物材料
        6.1.2 菌種和載體
        6.1.3 試驗所用試劑盒
        6.1.4 84K組織培養(yǎng)所用培養(yǎng)基配置
    6.2 實驗方法
        6.2.1 過表達載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        6.2.2 RNA干擾載體構建
        6.2.3 外植體消毒和84K楊擴繁
        6.2.4 農(nóng)桿菌介導遺傳轉(zhuǎn)化
        6.2.5 轉(zhuǎn)化系分子鑒定
    6.3 實驗結果
        6.3.1 過表達載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        6.3.2 RNA干擾載體構建
        6.3.3 84K楊PtrAMT1；6基因遺傳轉(zhuǎn)化
        6.3.4 84K楊過表達系分子鑒定
        6.3.5 84K楊過抑制系分子鑒定
    6.4 本章小結
結論
參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表的學術論文
致謝



本文編號：3596319