毛竹葉中含有大量具有生物活性的黃酮碳苷,C-糖基轉移酶（C-glycosyltransferase,CGT）是黃酮碳苷生物合成代謝途徑中C-糖基化的關鍵酶。目前,還沒有關于毛竹葉黃酮碳苷的C-糖基化途徑及其CGT的報道。本研究從毛竹葉中通過提取、硫酸銨分層沉淀、透析、葡聚糖凝膠過濾、陰離子交換層析、超濾脫鹽等方法分離純化CGT,并對以上分離純化過程進行優(yōu)化。分別選擇圣草素查爾酮、圣草素、木犀草素作為底物,根據(jù)已建立的CGT催化的C-糖基化反應體系,進行可能的C-糖基化途徑驗證。運用數(shù)據(jù)庫搜索比對和Q-TOF檢測分析等方法手段,找出毛竹CGT的基因序列和一級結構氨基酸序列。取得如下結果:1.實驗以CGT反應體系中產物和底物的主要黃酮（葒草苷、異葒草苷、圣草素查爾酮、圣草素、木犀草素）為目標,以相應的標準品為對照,建立了高效液相色譜檢測方法:Water XTerra?MS C18 5μm（250 mm×4.6 mm）色譜柱;流動相為乙腈、5‰乙酸/水緩沖液,梯度洗脫。從精密度、穩(wěn)定性和回收率對該方法進行評價。毛竹葉黃酮碳苷CGT反應體系的建立:通過研究緩沖鹽p H,反應溫度,反應時間,底物... 

【文章來源】：中國林業(yè)科學研究院北京市

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

毛竹林Fig.1-1P.edulisforest

該方法具有靈敏度高，分辨率高，質應用于生物大分子質譜分析的軟離子化技術主要輔助激光解吸電離質譜（MALDI-MS）、快原子轟（ISI-MS），其中最常用的是 ESI-MS 和 MALDy1z1R1OR2OR3OR4x3z2x1z3x2y2y3

圖 2-1 350 nm 處五種標準品的 HPLC 色譜圖Fig.2-1 The HPLC chromatogram of the mixed standards at 350 nm1-異葒草苷; 2-葒草苷; 3-圣草素查爾酮; 4-圣草素; 5-木犀草素1-Isoorientin; 2-Orientin; 3-Eriodictyol chalcone; 4- Eriodictyol; 5-LuteolinWater XTerra MS C18 5 μm (250 mm×4.6 mm) 色譜柱；流動相為乙腈、5‰乙酸/水液，梯度洗脫，洗脫方法見表 2-5；流速 1 mL/min；柱溫 30 oC；進樣量 10 μL。圣查爾酮、圣草素的檢測波長是 289.1nm，木犀草素、葒草苷以及異葒草苷的檢測波為 350 nm。以保留時間以及紫外吸收波長定性，峰面積測定五種黃酮的變化。圖 2-1350 nm 處五種標準品混合液的 HPLC 色譜圖。從圖中可以看出在以上的色譜條件下五合物可以完全分開。.1.2 方法與性能評價）標準曲線

【參考文獻】：
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本文編號：3571265