毛竹葉中含有大量具有生物活性的黃酮碳苷,C-糖基轉(zhuǎn)移酶（C-glycosyltransferase,CGT）是黃酮碳苷生物合成代謝途徑中C-糖基化的關(guān)鍵酶。目前,還沒有關(guān)于毛竹葉黃酮碳苷的C-糖基化途徑及其CGT的報(bào)道。本研究從毛竹葉中通過提取、硫酸銨分層沉淀、透析、葡聚糖凝膠過濾、陰離子交換層析、超濾脫鹽等方法分離純化CGT,并對以上分離純化過程進(jìn)行優(yōu)化。分別選擇圣草素查爾酮、圣草素、木犀草素作為底物,根據(jù)已建立的CGT催化的C-糖基化反應(yīng)體系,進(jìn)行可能的C-糖基化途徑驗(yàn)證。運(yùn)用數(shù)據(jù)庫搜索比對和Q-TOF檢測分析等方法手段,找出毛竹CGT的基因序列和一級結(jié)構(gòu)氨基酸序列。取得如下結(jié)果:1.實(shí)驗(yàn)以CGT反應(yīng)體系中產(chǎn)物和底物的主要黃酮（葒草苷、異葒草苷、圣草素查爾酮、圣草素、木犀草素）為目標(biāo),以相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品為對照,建立了高效液相色譜檢測方法:Water XTerra?MS C18 5μm（250 mm×4.6 mm）色譜柱;流動(dòng)相為乙腈、5‰乙酸/水緩沖液,梯度洗脫。從精密度、穩(wěn)定性和回收率對該方法進(jìn)行評價(jià)。毛竹葉黃酮碳苷CGT反應(yīng)體系的建立:通過研究緩沖鹽p H,反應(yīng)溫度,反應(yīng)時(shí)間,底物... 

【文章來源】：中國林業(yè)科學(xué)研究院北京市

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

毛竹林Fig.1-1P.edulisforest

該方法具有靈敏度高，分辨率高，質(zhì)應(yīng)用于生物大分子質(zhì)譜分析的軟離子化技術(shù)主要輔助激光解吸電離質(zhì)譜（MALDI-MS）、快原子轟（ISI-MS），其中最常用的是 ESI-MS 和 MALDy1z1R1OR2OR3OR4x3z2x1z3x2y2y3

圖 2-1 350 nm 處五種標(biāo)準(zhǔn)品的 HPLC 色譜圖Fig.2-1 The HPLC chromatogram of the mixed standards at 350 nm1-異葒草苷; 2-葒草苷; 3-圣草素查爾酮; 4-圣草素; 5-木犀草素1-Isoorientin; 2-Orientin; 3-Eriodictyol chalcone; 4- Eriodictyol; 5-LuteolinWater XTerra MS C18 5 μm (250 mm×4.6 mm) 色譜柱；流動(dòng)相為乙腈、5‰乙酸/水液，梯度洗脫，洗脫方法見表 2-5；流速 1 mL/min；柱溫 30 oC；進(jìn)樣量 10 μL。圣查爾酮、圣草素的檢測波長是 289.1nm，木犀草素、葒草苷以及異葒草苷的檢測波為 350 nm。以保留時(shí)間以及紫外吸收波長定性，峰面積測定五種黃酮的變化。圖 2-1350 nm 處五種標(biāo)準(zhǔn)品混合液的 HPLC 色譜圖。從圖中可以看出在以上的色譜條件下五合物可以完全分開。.1.2 方法與性能評價(jià)）標(biāo)準(zhǔn)曲線

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號：3571265