MicroRNA（miRNA）是一類非編碼的小RNA（Small RNA）,通過調(diào)節(jié)其靶基因的表達(dá)來影響植物的生長(zhǎng)發(fā)育進(jìn)程。一些miRNA在植物逆境脅迫的適應(yīng)方面發(fā)揮著重要的作用。本試驗(yàn)通過對(duì)獲得的8個(gè)轉(zhuǎn)miR156過表達(dá)白樺株系為對(duì)象,探討miR156對(duì)白樺生長(zhǎng)發(fā)育及抗性的影響。主要研究包括:1.對(duì)已獲得的8個(gè)轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行分子檢測(cè),確認(rèn)其已經(jīng)整合到白樺基因組中并正常表達(dá);轉(zhuǎn)基因葉片變小,葉緣鋸齒變淺,葉基角變大,苗高變低,地徑變細(xì),側(cè)枝增多且變粗,IAA和GA3含量升高。2.抗病試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn):轉(zhuǎn)基因株系葉片的病斑數(shù)明顯小于非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩晗?轉(zhuǎn)基因株系SOD、POD、PPO、PAL、CAT的活性都顯著高于非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩晗档幕钚?同時(shí)測(cè)定了相關(guān)抗病基因的表達(dá)量,轉(zhuǎn)基因株系中MYB106、MYB61、RPP13、RPM1的表達(dá)量與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩晗迪啾染险{(diào)表達(dá)。3.0.4%NaCl處理12 d后,轉(zhuǎn)基因株系的鹽害指數(shù)達(dá)到60%,而對(duì)照株系僅19%,且復(fù)水后的相對(duì)生長(zhǎng)量小于對(duì)照株系;并對(duì)脅迫處理過程中各株系的SOD活性、MDA含量及H202含量進(jìn)行了測(cè)定,發(fā)現(xiàn):隨著脅迫開始后,轉(zhuǎn)基因株系中S... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１轉(zhuǎn)ｍ／Ｗ５６植株的ＰＣＲ檢測(cè)??Ｍ：?ＭａｒｋｅｒＤＬ２０００；?１：?ｐＧＷＢ２－ｍｉＲ１５６；?２：?ＷＴ；?３－１０：轉(zhuǎn)化子??

５〇〇ｂｐ??ｉ〇°＾??圖２－１轉(zhuǎn)ｍ／Ｗ５６植株的ＰＣＲ檢測(cè)??Ｍ：?ＭａｒｋｅｒＤＬ２０００；?１：?ｐＧＷＢ２－ｍｉＲ１５６；?２：?ＷＴ；?３－１０：轉(zhuǎn)化子??２．３．２轉(zhuǎn)基因白樺的定量分析??以轉(zhuǎn)基因及非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩晗档娜~片為材料，選取非轉(zhuǎn)基因株系為對(duì)照，按照－??ＡＡＣｔ計(jì)算分析過表達(dá)株系中ｗ／７？／５６的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果如圖２－２?：?８?jìng)�(gè)超表達(dá)株系中??ｗ／ｉ？７５（５的相對(duì)表達(dá)量均顯著高于對(duì)照株系（ＷＴ），尤其是０ｘ１５６－２和０ｘ１５６－４株系中??／ｍ７？／５６的表達(dá)量最高，分別比對(duì)照株系上調(diào)了?２４．２５和７．４６倍。??６?ｒ??ｆ??５?？?丄??由??４?■??＿?｜｜?ｅ??刼３?－?．?Ｔ??懈?ｉ?￥?ｃｄ?ｃｄ??萇２?＿?”?ｒｆｌ?＆?ｒ４?丄??要?＾?１?＇?Ｔ?ｂ?１??１?－?丄?ｒｎ?．??０?３?Ｊ?Ｉ?．?Ｉ?Ｉ?．?Ｉ?Ｉ?．?Ｍ?．?Ｈ?．?Ｎ?．?ｆｌ?．?Ｍ?．??ＷＴ?０ｘ１５６－１?ｏｘ１５６－２?０ｘ１５６－３?０ｘ１５６－４?０ｘ１５６－５?０ｘ１５６－６?０ｘ１５６－７?ｏｘ１５６＾??？１?Ｌ??圖２－２不同轉(zhuǎn)化子中ｍ；７？７５６的定量分析??２．３．３?ｍ／／？／５６對(duì)白樺葉片發(fā)育的影響??２．３．３．１轉(zhuǎn)基因白樺葉片的長(zhǎng)、寬測(cè)定??測(cè)定辦《？７？／５６過表達(dá)白樺與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ瞻讟宓娜~片的長(zhǎng)和寬，計(jì)算長(zhǎng)寬比，并??用ＳＰＳＳ軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的多重比較和方差分析，結(jié)果如圖２－３，?２－４，?２－５，?２－６所示：轉(zhuǎn)??基因株系的葉片與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩晗档娜~片長(zhǎng)、寬差異達(dá)到極顯著

圖２－５?ｏｔ；７Ｗ５６過表達(dá)白樺的葉寬?圖２－６?０Ｘ１５６白樺與ＷＴ的葉長(zhǎng)寬比??２．３．３．２轉(zhuǎn)基因白樺葉片形態(tài)??通過對(duì)葉片形態(tài)及葉基角的測(cè)量，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因株系與對(duì)照相比葉緣鋸齒變淺（圖２－??７）、葉基角變大（圖２－８），其中對(duì)照株系葉基角為１８０度，轉(zhuǎn)基因株系平均葉基角為??２４２．５?度。??Ｄ?■［?????：二．?ＷＴ?ＯＸ１５６－４?ＯＸ１５６－６??圖２－７轉(zhuǎn)基因白樺與對(duì)照株系葉片?圖２－８轉(zhuǎn)基因白樺與對(duì)照株系葉片葉基角??２．３．３．３轉(zhuǎn)基因白樺葉片的葉綠素含量測(cè)定??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]植物microRNA與逆境響應(yīng)研究進(jìn)展[J]. 許振華,謝傳曉.  遺傳. 2010(10)



本文編號(hào)：3569266