橡膠種植業(yè)在中國熱區(qū)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中具有舉足輕重的地位,更作為海南經(jīng)濟的基礎(chǔ)產(chǎn)業(yè)和優(yōu)勢產(chǎn)業(yè),然而由膠孢炭疽菌引起的炭疽病是橡膠樹的重大病害之一,對各時期的橡膠樹葉片造成了不同程度的危害,嚴(yán)重降低橡膠的年產(chǎn)量。而導(dǎo)致該病害的主要病原真菌—膠孢炭疽菌不僅生長范圍非常廣泛,其侵染寄主方式也多種多樣,由此可見,深入研究分析該菌在致病過程中相關(guān)基因的表達(dá)及調(diào)控網(wǎng)絡(luò),了解膠孢炭疽菌與宿主的互作機制,進(jìn)而為有效防治該病菌提供重要的理論指導(dǎo)。G蛋白信號調(diào)控因子（Regulatorsof G-protein signaling, RGS）是G蛋白的一類負(fù)調(diào)控因子,在植物病原菌生長發(fā)育及致病過程中發(fā)揮著重要的作用,其中RGS結(jié)構(gòu)域是RGS蛋白發(fā)揮GTP酶激活作用的關(guān)鍵基礎(chǔ)。在本實驗室的前期研究中,我們從膠孢炭疽菌中鑒定了 10個潛在的RGS蛋白,它們都包含RGS功能域,本研究在其基礎(chǔ)上通過克隆膠孢炭疽菌的3個RGS基因,分別是CgRGS1、CgRGS2和CgRGS7,分析其蛋白序列,并進(jìn)行相應(yīng)的生物性狀研究,進(jìn)一步確證其生物學(xué)功能。取得的結(jié)果如下:1.克隆獲得了 3個基因,經(jīng)比對發(fā)現(xiàn)其分別與稻瘟病菌中的MoRG... 

【文章來源】：海南大學(xué)海南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２?ＣｇＲＧＳｌ基因敲除原理??Ｆｉ．?２?Ｇｅｎｅ?ｋｎｏｃｋｏｕｔｒｉｎｃｉｌｅ?ｏｆ?ＣＲＧＳｌ??

５２８位氨基酸），在Ｃ末端第５６６？７１２位氨基酸含有一個ＲＧＳ功能域（圖３）。理??化性質(zhì)預(yù)測顯示ＣｇＲＧＳｌ分子質(zhì)量約為８０９７０．２７?Ｄａ，理論等電點（ｐｉ）為９．０９。??將ＣｇＲＧＳｌ在ＧｅｎＢａｎｋ中利用ＢＬＡＳＴｐ工具比對，利用氨基酸序列進(jìn)行同源檢??索，選擇１２個來自不同真菌的ＲＧＳ蛋白序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹（圖４）。ＣｇＲＧＳｌ與??同屬同種的?Ｃ?ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ＂Ｎａｒａ?ｇｃ５?ＲＧＳ?蛋白（ＸＰ＿００７２７８４１６．１）相似度達(dá)到?９９％，??此外ＣｇＲＧＳｌ與棉花黃萎病菌（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ?ｄａｈｌｉａｅ）、蘋果腐爛病菌ＱＶａｌｓａ?ｍａｌｆ）??

，陽性轉(zhuǎn)化子居大多數(shù)，以提取出的轉(zhuǎn)化子基因組為模版，并且以野生型基因組為模版??做空白對照，利用?３?對引物?ＣｇＲＧＳｌＦ＋ＣｇＲＧＳｌＲ、ＣｇＲＧＳｌＵＵ＋ＰＫ?ＰＩ?１＋ＣｇＲＧＳｌＤＤ??（附錄１）進(jìn)行篩選驗證，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)化子第６９號的ＣｇＲＧＳｌＦ＋ＣｇＲＧＳＩＲ無擴增條??帶，而通過ＣｇＲＧＳｌ?ＵＵ＋ＰＩ、ＰＩｌ＋ＣｇＲＧＳＩＤＤ引物進(jìn)行鑒定，擴增出的目的條帶與??設(shè)計的引物序列大小一致，約１５００ｂｐ?（圖５），即確定６９號為陽性轉(zhuǎn)化子，命名為??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]膠孢炭疽菌致病相關(guān)基因Plv2功能分析[J]. 鄭肖蘭,李秋潔,許沛冬,吳偉懷,梁艷瓊,鄭金龍,習(xí)金根,李銳,黃興,李樂,楊青青,賀春萍,易克賢.  植物病理學(xué)報. 2017(05)
[2]膠孢炭疽菌CgSho1基因的克隆與功能分析[J]. 張楠,柳志強,吳曼莉,李曉宇.  植物病理學(xué)報. 2017(01)
[3]萘乙酸對橡膠樹膠胞炭疽菌生長速率、孢子萌發(fā)率和附著胞形成率的影響[J]. 鄭肖蘭,胡飛,梁艷瓊,吳偉懷,鄭金龍,習(xí)金根,李銳,賀春萍,易克賢.  熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(08)
[4]9種殺菌劑對核桃炭疽病菌的抑制作用及聯(lián)合毒力[J]. 王凡,胡奎,江慧,陳然,李黎,方洋,李俊凱.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(06)
[5]稻瘟菌侵染過程相關(guān)信號通路研究進(jìn)展[J]. 葉幸,孫群,劉柱.  中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報. 2015(01)
[6]膠孢炭疽菌侵染過程相關(guān)基因研究進(jìn)展[J]. 韓長志.  廣東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(09)
[7]天然橡膠種植現(xiàn)狀及市場需求預(yù)測分析[J]. 鞠巖峰,張劍,吳潤,師君,王硯峰.  林業(yè)資源管理. 2014(01)
[8]絲狀真菌G蛋白信號途徑的研究進(jìn)展[J]. 李利,陳莎,毛濤,陳福生.  微生物學(xué)通報. 2013(08)
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[10]2011年瓊中縣橡膠樹炭疽病重發(fā)成因及防控對策[J]. 陳仁強.  現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2011(17)

博士論文
[1]稻瘟病菌G蛋白及MAPK信號途徑相關(guān)基因的功能分析[D]. 張海峰.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[2]大豆疫霉G蛋白和鈣信號途徑的功能分析[D]. 華辰雷.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[3]玉米大斑病菌MAPK基因的克隆和功能分析[D]. 范永山.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004
[4]鈣信號傳導(dǎo)途徑參與稻瘟病菌生長及致病性的調(diào)控[D]. 王立安.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004

碩士論文
[1]22種植物提取物防治橡膠樹炭疽病的研究[D]. 古鑫.海南大學(xué) 2012
[2]橡膠老葉炭疽病病原菌的生物學(xué)、對藥物的敏感性及ITS序列分析[D]. 崔昌華.華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號：3530199