發(fā)布時間：2021-11-26 16:06

　　CBF是植物抗逆轉(zhuǎn)錄因子之一,為研究編碼該蛋白的基因在大青楊中的功能,為楊樹抗逆基因工程提供基因材料和理論支持,本研究以大青楊組培苗為試驗材料,克隆獲得大青楊PuCBF基因,對其進(jìn)行生物信息學(xué)分析,構(gòu)建PuCBF過量表達(dá)載體,將其轉(zhuǎn)入煙草,分析該基因?qū)D(zhuǎn)基因煙草抗旱耐寒能力的影響,驗證該基因的功能。另外,采用正交試驗設(shè)計對大青楊組培再生體系進(jìn)行了優(yōu)化。主要結(jié)果如下:1、大青楊PuCBF基因與毛果楊的該基因同源性最高（98%）。該基因編碼231個氨基酸,氨基酸肽鏈表現(xiàn)為親水性。NJ進(jìn)化樹分析發(fā)現(xiàn)該基因編碼的氨基酸與鉆天楊中該氨基酸的親緣關(guān)系更近。熒光定量PCR發(fā)現(xiàn)該基因在旱脅迫下,表達(dá)量有很大提高。2、對大青楊不定芽誘導(dǎo)的影響最大的因素為NAA;對不定芽增殖的影響最大的因素是NAA;對叢生苗生根影響最大的因素是激素類型IBA;且培養(yǎng)基類型和激素的濃度對大青楊再生體系有著較顯著的影響。最適宜大青楊分化的培養(yǎng)基為:WPM+0.5mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA,誘導(dǎo)率達(dá)100%;最適宜大青楊叢生芽增殖的培養(yǎng)基為:MS+0.05mg/L 6-BA+0.01mg/L NAA,芽健壯;... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

大青楊總RNA電泳檢測

2 大青楊 PuCBF 基因的獲得及時序表達(dá)分析圖 2-1 大青楊總 RNA 電泳檢測基因克隆與鑒定錄為 cDNA，進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，PCR 產(chǎn) 700 bp 左右（圖 2-2）。s→s→

- 11-圖 2-3 重組質(zhì)粒 PCR 檢測測序，得到的以下核苷酸序列ATTCGTTCTCACCTGACAAGCAAGAATCATCTTTCTCGCCCAGTTCGAACGAGAAAGTCTTACTAGCATTCAAGGAGACTCGTCATCCAATCTTTAGAGGT

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3520490