微管由α-微管蛋白和β-微管蛋白以異二聚體的形式聚合而成,與微絲和中間纖維共同組成了細胞骨架。微管在植物細胞形態(tài)、植株生長發(fā)育、木材形成和抗逆等方面具有重要作用。微管列陣的動態(tài)變化與功能受到微管蛋白和微管結(jié)合蛋白的調(diào)控。SPR1蛋白是植物特有的一種微管結(jié)合蛋白,各項研究表明SPR1參與調(diào)節(jié)周質(zhì)微管列陣的排列,從而對植物細胞的生長方向產(chǎn)生影響,并促進鹽脅迫下微管的解聚,提高植物對鹽脅迫的耐受性。目前對林木微管蛋白功能的研究鮮有報道,特別是微管調(diào)控林木形態(tài)與材性的分子機制的研究尚屬空白,且關(guān)于林木SPR1蛋白的功能及其對微管的調(diào)控機制尚不明確。為獲得觀察微管形態(tài)的活體材料,本研究以毛果楊微管蛋白Pt TUA5和Pt TUB16基因序列為模板設(shè)計引物,同源克隆得到了84K楊的84KTUA5和84KTUB16基因序列,分別構(gòu)建84KTUA5和84KTUB16與紅色熒光蛋白m Cherry融合的四種植物過表達載體,經(jīng)過煙草瞬時表達驗證后轉(zhuǎn)化84K楊;以毛果楊SPR1基因序列為模板設(shè)計引物,對84K楊的84KSPR1基因進行同源克隆,通過酵母雙雜交技術(shù)篩選84KSPR1的候選互作蛋白,利用Bi F... 

【文章來源】：北京林業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

微管蛋白的異二聚體晶體結(jié)構(gòu)（刁磊，2019）

PCR鑒定結(jié)果

植物過表達載體的構(gòu)建及84K楊遺傳轉(zhuǎn)化25由北京擎科公司完成。載體構(gòu)建過程如圖3-1所示圖3-1植物表達載體的構(gòu)建過程Fig3-1Constructionprocessofplantexpressionvector3.1.2.2農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化將構(gòu)建成功的重組質(zhì)粒通過電擊轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌GV3101中。質(zhì)粒提取步驟同3.1.2.1，電擊轉(zhuǎn)化法如下：（1）取1μL質(zhì)粒加入100μLGV3101感受態(tài)細胞中混勻，轉(zhuǎn)入預(yù)冷后的1mm電轉(zhuǎn)杯中，用電轉(zhuǎn)儀進行電擊；（2）電擊后，在電轉(zhuǎn)杯中分次加入共600μLLB液體培養(yǎng)基與菌液混勻，轉(zhuǎn)入1.5mLEP管中，200rpm，28℃振蕩培養(yǎng)3h；（3）將菌液涂布在含有Rif（50mg/L）、Kana（50mg/L）和Gent（50mg/L）的LB固體培養(yǎng)基上，28℃倒置培養(yǎng)2天左右，（4）挑取單菌落接種到5mL含Rif（50mg/L）、Kana（50mg/L）和Gent（50mg/L）的LB液體培養(yǎng)基中，28℃，220rpm振蕩培養(yǎng)15h，用于保菌及后續(xù)實驗；同時進行菌落PCR鑒定，PCR鑒定所用引物84KTUA5-UTR和84KTUA16-UTR的序列信


本文編號：3482871