植物在生物或非生物脅迫下,細(xì)胞質(zhì)的銅鋅超氧化物歧化酶（Copper/Zincsuperoxide dismutases,簡稱Cu/Zn SOD,CSD）通過超氧化物歧化酶的銅分子伴侶（Copper chaperone for superoxide dismutase,簡稱CCS）途徑和非依賴CCS激活途徑激活從而發(fā)揮抗氧化解毒作用。生物細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽還原酶（Glutathione reductase,簡稱GR）催化氧化型谷胱甘肽轉(zhuǎn)化為還原型谷胱甘肽（glutathione,GSH）,GSH可能將銅離子運送至SOD并使其激活,該酶可能與植物細(xì)胞質(zhì)CSD的非CCS激活途徑相關(guān)。本研究通過RT-PCR的方法克隆了長度為1485bp、編碼495個氨基酸的巨尾桉谷胱甘肽還原酶（Gen Bank Accession Number:KU904639）,該酶定位于植物細(xì)胞質(zhì)。構(gòu)建了p ET-Eu GR原核表達(dá)載體并建立了GR的原核表達(dá)體系:37℃,0.1m M的IPTG濃度,誘導(dǎo)4h時GR能夠穩(wěn)定表達(dá)。通過GR酶活檢測表明轉(zhuǎn)化菌株p ET-Eu GR的GR活性均高于對照菌株,說明外源基因的原核表達(dá)產(chǎn)物... 

【文章來源】：華僑大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

植物中三種CSD的激活途徑[5]

他因子的協(xié)同作用。除了植物體外，人體內(nèi)也有 GSH 能夠參與非 CCS 激活途徑的有力證據(jù)。例如，Marjatta Son[18]等人通過研究表達(dá) CSD 但缺乏銅離子伴侶的轉(zhuǎn)基因小鼠線粒體對于 SOD1 激活途徑的作用發(fā)現(xiàn)，人類的 SOD1 能夠利用 GSH 通過非依賴于CCS 激活途徑獲取 Cu2+，形成分子內(nèi)部的二硫化物，并且與依賴于 CCS 激活途徑不同的是，非依賴于 CCS 的激活并不需要氧氣可能甚至在還原狀態(tài)下發(fā)揮作用。綜合近年來的實驗結(jié)果，目前研究者已經(jīng)預(yù)測出兩種 GSH 作為運銅載體的作用模型：其一是 GSH 與 Cu2+、CSD 與未知的支架蛋白因子相互作用形成支架蛋白-GSH-Cu2+-CSD 四聚復(fù)合體，隨后復(fù)合體中 GSH 將 Cu2+交付給 CSD 使其激活同時復(fù)合體解體重新釋放 GSH 和支架蛋白；其二是 GSH 與 Cu2+結(jié)合后與某種未知的支架蛋白形成復(fù)合體，GSH 將 Cu2+交付于支架蛋白后重新釋放，隨后支架蛋白將攜帶的 Cu2+轉(zhuǎn)移至 CSD 并使其激活[19]。而這種未知蛋白目前尚不明確。

第 2 章 巨尾桉 GR 基因的克隆帶亮度約為 28s 條帶亮度的兩倍，而 5s 條帶由RNA 純化試劑盒純化巨尾桉總 RNA，（1%瓊脂p 左右出現(xiàn)一條拖尾 mRNA 條帶），可繼續(xù)后續(xù)實R 克隆巨尾桉 GR 基因mRNA 為模板，巨尾桉 FSD 基因的引物作為陽性對目的片段進(jìn)行 RT-PCR 擴(kuò)增。取膠回收產(chǎn)物 2 μ 2.2，其中 GR 基因的引物 1、3 未擴(kuò)增出預(yù)測的500 bp 大小的目的條帶，我們選擇該單一條帶作回收產(chǎn)物 2 μL，進(jìn)行 1%瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]銅伴侶蛋白CCS介導(dǎo)銅鋅-超氧化物歧化酶激活的過程[J]. 唐玲,馮琳,劉揚,胡凱,周小秋.  動物營養(yǎng)學(xué)報. 2011(08)



本文編號：3432786