發(fā)布時間：2021-09-23 07:22

　　越南槐（Sophora tonkinensis Gapnep）別名廣豆根、苦豆根、山豆根、柔枝槐,是豆科多年生灌木植物,主要藥效成分是生物堿,具有很高的經(jīng)濟價值,廣西是越南槐的主要產(chǎn)區(qū),目前越南槐的研究主要集中在藥材鑒別和藥理作用方面,對廣西、貴州、云南等地越南槐種質(zhì)資源遺傳多樣性缺乏系統(tǒng)性研究,導致對越南槐保育策略的選擇存在盲目性。本研究以越南槐的葉片為材料,利用cpDNA（葉綠體基因組）分子標記及擴增片段長度多態(tài)性（AFLP）技術,對不同產(chǎn)地的越南槐進行遺傳多樣性分析,以期為越南槐親緣關系研究提供分子生物學依據(jù),為越南槐遺傳保育奠定基礎。主要研究結果如下:1、利用3種略有不同的DNA提取方法分別提取越南槐樣品DNA，對比獲得的DNA樣品質(zhì)量,結果表明利用樣品預處理法提取的越南槐基因組DNA效果最好。2、篩選了 5對引物用于48份材料進行不同cpDNA標記的擴增。48份材料中擴增出cpDNA序列,變異位點為38個堿基,轉(zhuǎn)換率14.01%,堿基顛換率21.02%，說明48份材料之間變異較大。通過對單倍型間分化指數(shù)Hd=0.826±0.040可將整個序列分為18個單倍型,從單倍型網(wǎng)絡圖中... 

【文章來源】：廣西大學廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１瓊脂糖凝膠的電泳檢測??Ｆｉｇ．?３－１?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＡＧＥ?（ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）??

ＯＤ２６０／２８０在正常范圍，ＯＤ２６０／２３０接近２．０，濃度在１００－３００ｎｇ／ｍＬ，三者相比樣品預??處理法提取效果最佳。??用１°／。的瓊脂糖凝膠上樣ｌｍＬ檢測，部分樣本跑膠檢測如圖３－１所示，檢測結果表??明：酚－氯仿－異戊醇提取法提取的ＤＮＡ難以分辨主帶，原因可能為提取過程中酚－氯仿－??異戊醇（２５：２４：１?）未將蛋白質(zhì)除盡，以及后續(xù)核算中含有殘留的酚類物質(zhì)過多；高ＰＶＰ??和Ｐ－巰基乙醇提取法結果顯示能提取條帶單一的基因組ＤＮＡ，提取越南槐ＤＮＡ產(chǎn)量較??高，但仍存在多糖；樣品預處理法提取的ＤＮＡ電泳結果顯示條帶清晰，單一，亮度高，??提取效果最好。??Ｍ?１?２?３?４?５?６?７?Ｓ?＾???圖３－１瓊脂糖凝膠的電泳檢測??Ｆｉｇ．?３－１?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＡＧＥ?（ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）??注：Ｍ：?ＤＬ１００００ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?１－３號泳道為酚－氯仿－異戊醇提取法獲得的越南槐ＤＮＡ；?４－６號??泳道為高ＰＶＰ和Ｐ－巰基乙醇提取法獲得的ＤＮＡ：?７－９號泳道為樣品預處理法獲得的ＤＮＡ。??Ｍ：?ＤＬ１００００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?ｌ－３１ａｎｅ：?ＤＮＡ?ｅｘｔｒａｃｔｅｄ?ｂｙ?ｐｈｅｎｏｌ－ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ－ｉｓｏａｍｙｌａｌｃｏｈｏｌ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ??ｍｅｔｈｏｄ；?４－６?ｌａｎｅ：?ＤＮＡ?ｅｘｔｒａｃｔｅｄ?ｂｙ?ｈｉｇｈ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ＰＶＰ?ａｎｄ?ｐ－ＭＥ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ?ｍｅｔｈｏｄ；?７－９１ａｎｅ

ＯＤ２６０／２８０在正常范圍，ＯＤ２６０／２３０接近２．０，濃度在１００－３００ｎｇ／ｍＬ，三者相比樣品預??處理法提取效果最佳。??用１°／。的瓊脂糖凝膠上樣ｌｍＬ檢測，部分樣本跑膠檢測如圖３－１所示，檢測結果表??明：酚－氯仿－異戊醇提取法提取的ＤＮＡ難以分辨主帶，原因可能為提取過程中酚－氯仿－??異戊醇（２５：２４：１?）未將蛋白質(zhì)除盡，以及后續(xù)核算中含有殘留的酚類物質(zhì)過多；高ＰＶＰ??和Ｐ－巰基乙醇提取法結果顯示能提取條帶單一的基因組ＤＮＡ，提取越南槐ＤＮＡ產(chǎn)量較??高，但仍存在多糖；樣品預處理法提取的ＤＮＡ電泳結果顯示條帶清晰，單一，亮度高，??提取效果最好。??Ｍ?１?２?３?４?５?６?７?Ｓ?＾???圖３－１瓊脂糖凝膠的電泳檢測??Ｆｉｇ．?３－１?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＡＧＥ?（ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）??注：Ｍ：?ＤＬ１００００ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?１－３號泳道為酚－氯仿－異戊醇提取法獲得的越南槐ＤＮＡ；?４－６號??泳道為高ＰＶＰ和Ｐ－巰基乙醇提取法獲得的ＤＮＡ：?７－９號泳道為樣品預處理法獲得的ＤＮＡ。??Ｍ：?ＤＬ１００００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?ｌ－３１ａｎｅ：?ＤＮＡ?ｅｘｔｒａｃｔｅｄ?ｂｙ?ｐｈｅｎｏｌ－ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ－ｉｓｏａｍｙｌａｌｃｏｈｏｌ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ??ｍｅｔｈｏｄ；?４－６?ｌａｎｅ：?ＤＮＡ?ｅｘｔｒａｃｔｅｄ?ｂｙ?ｈｉｇｈ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ＰＶＰ?ａｎｄ?ｐ－ＭＥ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ?ｍｅｔｈｏｄ；?７－９１ａｎｅ

【參考文獻】：
期刊論文
[1]柿屬植物cpDNA分子標記開發(fā)及遺傳變異研究[J]. 傅建敏,索玉靜,張嘉嘉,譚曉風.  中南林業(yè)科技大學學報. 2017(06)
[2]黑藻cpDNA分子標記的篩選及其遺傳多樣性的初步研究[J]. 付春霖,戴小康,李小燕,劉星.  植物科學學報. 2017(01)
[3]基于煙草葉綠體基因組和線粒體基因組SSR標記的煙屬植物遺傳多樣性分析[J]. 曾建敏,陳學軍,吳興富,焦芳嬋,肖炳光,李永平,童治軍.  中國煙草學報. 2016(04)
[4]InDel標記的研究和應用進展[J]. 楊潔,赫佳,王丹碧,施恩,楊文宇,耿其芳,王中生.  生物多樣性. 2016(02)
[5]芒屬植物葉綠體InDel標記的開發(fā)與應用[J]. 薛宏,易自力,肖亮,丁力,彭思佳,蔣建雄.  現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2015(07)
[6]9個野生中國櫻桃群體葉綠體DNA trnQ-rps16序列變異及其遺傳結構分析[J]. 陳濤,王小蓉,羅華,王春濤,張家志,羅明敏.  遺傳. 2012(11)
[7]梨屬葉綠體非編碼區(qū)trnL-trnF和accD-psaI特征及其在系統(tǒng)發(fā)育研究中的應用價值[J]. 胡春云,鄭小艷,滕元文.  園藝學報. 2011(12)
[8]山豆根及其常見混淆品的鑒別[J]. 張云方.  海峽藥學. 2011(12)
[9]遺傳標記的類型、作用與水稻遺傳標記的研究現(xiàn)狀[J]. 陶紅劍,林璐,蘇巖,黃大年.  中國稻米. 2011(05)
[10]廣西廣豆根藥材基源植物資源調(diào)查研究[J]. 周雅琴,譚小明,吳慶華,凌征柱,余麗瑩.  廣西科學. 2010(03)

博士論文
[1]中國北方野生杜梨的遺傳多樣性和譜系地理研究[D]. 宗宇.浙江大學 2014
[2]中國豆梨與川梨的遺傳多樣性和群體遺傳結構研究[D]. 劉晶.浙江大學 2013

碩士論文
[1]基于SSR標記及ITS、cpDNA序列的刺梨遺傳多樣性分析[D]. 張懷山.貴州大學 2017
[2]基于ITS和cpDNA分子標記的江西建蘭野生居群遺傳結構研究[D]. 李亞.南昌大學 2013
[3]基于ITS和cpDNA江西蕙蘭野生居群遺傳結構研究[D]. 龔黃莎.南昌大學 2013
[4]鹿蹄草遺傳多樣性的AFLP與SRAP分析[D]. 王威威.東北農(nóng)業(yè)大學 2013
[5]基于cpDNA單倍型的銀杏群體遺傳與譜系分析[D]. 曾真.浙江大學 2008
[6]湖北海棠SRAP體系建立及其遺傳多樣性研究[D]. 郭大勇.華中農(nóng)業(yè)大學 2007
[7]柿屬植物DNA提取純化檢測技術體系的建立[D]. 易慶平.華中農(nóng)業(yè)大學 2006



本文編號：3405287