為探究具有后熟特性種子休眠解除機制,本試驗以銀杏（Ginkgo biloba L.）種子為試材,取其種胚作為研究對象。分別從蛋白的不同提取方法（直接提取法、酚提取法、Tris-HCl法、Trizol提取法和TCA-丙酮-酚法）、裂解液中的尿素濃度（6mol/L、7mol/L、 8mol/L、9mol/L）、蛋白上樣量（1500μg、1650 μg、1800μg）和分離膠濃度（10%、12.5%、15%）等4個方面對銀杏種胚的蛋白圖譜進行優(yōu)化,篩選出適宜雙向電泳的條件；通過對銀杏種胚形態(tài)大小等級的劃分,進一步判斷不同發(fā)育狀態(tài)種胚的發(fā)芽能力；在此基礎上,根據(jù)銀杏種胚形態(tài)大小的不同,篩選與種胚發(fā)育相關的差異蛋白,并對找到的差異蛋白進行質譜分析。探究銀杏種胚后熟的發(fā)育機制,為揭示種子萌發(fā)的分子機制奠定基礎。本研究主要結果如下：1.采用TCA-丙酮-酚法提取銀杏種胚蛋白,在裂解液中尿素濃度為8mol/L、上樣量為1650μg、分離膠濃度為12.5%的方法,可以獲得分辨率較高、背景更加清晰、重復性更好的銀杏種胚蛋白質雙向電泳圖譜。建立了適合銀杏種胚蛋白雙向電泳的體系。2.按種胚長度將銀杏種胚發(fā)育分... 

【文章來源】：沈陽農業(yè)大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 種子發(fā)育過程中的蛋白質組研究
        1.1.1 組織分化階段的關鍵蛋白
        1.1.2 與胚和胚乳發(fā)育相關的蛋白
        1.1.3 成熟干燥階段的關鍵蛋白
    1.2 種子休眠相關的蛋白質組研究
    1.3 種子萌發(fā)過程中的蛋白質組研究
        1.3.1 種子吸脹相關的蛋白質
        1.3.2 種子代謝相關的蛋白質
        1.3.3 種子胚根伸長相關的蛋白質
        1.3.4 種子萌發(fā)期間代謝途徑的研究
    1.4 本研究目的與意義
第二章 銀杏種胚蛋白質雙向電泳體系的建立
    2.1 材料與方法
        2.1.1 儀器與試劑
        2.1.2 銀杏種胚蛋白提取方法
        2.1.3 裂解液濃度
        2.1.4 蛋白上樣量
        2.1.5 雙向電泳
        2.1.6 染色
        2.1.7 圖像掃描與數(shù)據(jù)分析
    2.2 結果與分析
        2.2.1 不同提取方法所得2-DE圖譜的比較
        2.2.2 裂解液中不同尿素濃度所得2-DE圖譜的比較
        2.2.3 不同上樣量所得2-DE圖譜的比較
        2.2.4 不同分離膠濃度所得2-DE圖譜的比較
    2.3 討論
        2.3.1 不同蛋白提取方法對2-DE結果的影響
        2.3.2 裂解液中不同尿素濃度對2-DE結果的影響
        2.3.3 不同蛋白上樣量對2-DE結果的影響
        2.3.4 不同分離膠濃度對2-DE結果的影響
第三章 不同發(fā)育狀態(tài)銀杏種胚差異蛋白質組學的研究
    3.1 材料
    3.2 方法
        3.2.1 銀杏種胚的分級
        3.2.2 發(fā)芽銀杏種子胚長的確定
        3.2.3 銀杏種胚發(fā)芽能力的測定
        3.2.4 蛋白質的提取
        3.2.5 蛋白質裂解及定量
        3.2.6 雙向凝膠電泳
        3.2.7 染色
        3.2.8 質譜分析
    3.3 結果與分析
        3.3.1 發(fā)芽銀杏種子胚長的確定
        3.3.2 銀杏種胚體外培養(yǎng)
        3.3.3 不同發(fā)育時期表達差異蛋白雙向電泳圖譜分析
        3.3.4 不同發(fā)育時期表達差異蛋白點的質譜鑒定結果
        3.3.5 不同發(fā)育時期表達差異蛋白點的功能分類
        3.3.6 脅迫與防御相關差異蛋白動態(tài)變化
    3.4 討論
        3.4.1 參與蛋白合成與折疊相關蛋白
        3.4.2 DNA與RNA合成相關蛋白
        3.4.3 脅迫與防御相關的蛋白
        3.4.4 與代謝相關的蛋白
        3.4.5 貯藏蛋白
        3.4.6 運輸相關的蛋白
        3.4.7 種胚生長相關蛋白
        3.4.8 銀杏特有功能蛋白
        3.4.9 未知蛋白
第四章 結論
參考文獻
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]不同未知功能結構域蛋白家族（DUFs）基因在植物中的生物學功能[J]. 羅成科,肖國舉,李明.  植物生理學報. 2015(02)
[2]種子活力與萌發(fā)的生理與分子機制研究進展[J]. 李振華,王建華.  中國農業(yè)科學. 2015(04)
[3]強休眠玉米種子休眠前后的蛋白差異表達[J]. 蘭海,冷亦峰,周樹峰,劉堅,榮廷昭.  植物遺傳資源學報. 2015(01)
[4]植物冷休克結構域蛋白的生物學功能研究進展[J]. 何俊平,王建平,朱家成,張書芬,文雁成,曹金華,趙磊.  湖北農業(yè)科學. 2014(14)
[5]種子休眠與萌發(fā)分子機制研究進展[J]. 賴曉輝,李群.  種子. 2014(05)
[6]水稻幾丁質酶基因的轉錄與表達特征[J]. 范偉,李雪姣,關明俐,繆劉楊,史佳楠,竇世娟,劉麗娟,李莉云,劉國振.  作物學報. 2014(04)
[7]不同層積處理方法對東北紅豆杉種子后熟過程中貯藏物質的影響[J]. 楊國會,孫立梅,邢力,張宏碩.  北方園藝. 2013(14)
[8]銀杏種子發(fā)育過程中淀粉顆粒和蛋白質的積累(譯)[J]. 姚明靜,劉麗萍,國天慶,趙麗.  山東食品發(fā)酵. 2013(01)
[9]甘蔗核苷二磷酸激酶（NDPK1）基因克隆及表達分析[J]. 梁潘霞,李楊瑞,楊麗濤.  熱帶作物學報. 2012(12)
[10]天女木蘭種子蛋白雙向電泳體系的建立[J]. 張曉林,陸秀君,馬蓓蓓,徐凱.  西北農林科技大學學報(自然科學版). 2012(08)

博士論文
[1]真核翻譯起始因子eIF3和eIF5的結構生物學研究[D]. 魏志毅.中國科學技術大學 2007

碩士論文
[1]椰肉發(fā)育過程中差異表達基因的分離和功能注釋[D]. 梁遠學.海南大學 2014



本文編號：3392582