毛竹屬于禾本科竹亞科單子葉植物,其細(xì)胞壁主要成分由纖維素和果膠組成。植物果膠中的2-酮-3-脫氧辛糖酸（KDO）是非常保守的八碳糖,主要通過KDO合成途徑合成。該途徑中阿拉伯糖-5-磷酸異構(gòu)酶（Arabinose-5-phosphate isomerase,KdsD）[EC:5.3.1.13]是KOD合成途徑的第一個關(guān)鍵的限速酶。但禾本科毛竹中KdsD的結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能尚不清楚。本研究以毛竹為研究對象,進(jìn)行了初步研究,結(jié)論如下;1.成功構(gòu)建得到毛竹KdsD蛋白的原核表達(dá)載體,經(jīng)過誘導(dǎo)、表達(dá),成功獲得了大量重組蛋白的可溶性表達(dá)。2.表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)Ni-NTA親和層析和分子篩層析（SEC）方法進(jìn)行酶蛋白的分離純化步驟,得到純度85%以上的高純度酶;分子篩層析和BN-PAGE結(jié)果發(fā)現(xiàn)純化后的目的蛋白KdsD在溶液中主要以多聚體、二聚體和單體形式存在,這同微生物來源KdsD酶在溶液中以四聚體形式存在很大差異;進(jìn)一步使用Western blotting和MALDI-TOF MASS技術(shù)對純化的蛋白進(jìn)行鑒定。3.測定了毛竹KdsD酶學(xué)性質(zhì),證明該酶催化反應(yīng)的最適pH值為8.5,最適作用溫度為37℃,各... 

【文章來源】：浙江農(nóng)林大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

細(xì)胞壁RG-II的結(jié)構(gòu)

辛糖酸-8 磷酸(KDO-8-P)與無機(jī)磷酸（Pi）；3) KDO-8-P 在 2-酮-3-脫氧辛糖 磷酸化酶（Kdo-8-P phosphatase, KdsC）作用下去磷酸形成 2-酮-3-脫氧辛糖KDO）；4) KDO 與 CTP 在 2-酮-3-脫氧辛糖酸胞苷酰轉(zhuǎn)移酶（CMP-Kdothetase）催化下，KDO 被激活與 CMP 偶聯(lián)形成 CMP-KDO；5)最后由 KDO酶（Kdo transferase, KdtA）介導(dǎo)，KDO 轉(zhuǎn)移到磷脂 A，連接類脂 A 與 O側(cè)鏈后插入革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁外膜的脂多糖（LPS）中，CMP 脫落，催化 KDO 的途徑中所涉及到的 5 種酶，在此途徑中都很保守，也就是說 KDO是很保守的，繼而表明 KDO 也是一種很保守的八碳糖，LIYI 在 2009 年攻HD 學(xué)位時的論文中也提到了此途徑的存在[27-30]，如圖 1.2。在植物中，KDO化過程以及合成途徑也是很保守的，涉及的 KdsD，KdsA，KdsB 酶與細(xì)菌具有同源性，且合成途徑發(fā)生在細(xì)胞溶膠質(zhì)中[31,32]。

E.coliKdsD和bfAPI結(jié)構(gòu)

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號：3359753