刺槐（Robinia psudoacaciaLinn.）又名洋槐,屬于豆科（Leguminosae）刺槐屬（Robinia L.）落葉喬木,原產(chǎn)美國(guó),具有較強(qiáng)的適應(yīng)性。四倍體刺槐（Tetraploid Robinia pseudoacacia Linn.）也稱多倍體刺槐,是由人工誘導(dǎo)二倍體刺槐染色體加倍而育成的優(yōu)良樹(shù)種。與二倍體刺槐相比,四倍體刺槐各項(xiàng)指標(biāo)均優(yōu)于二倍體,具有耐鹽堿、耐干旱、抗病蟲(chóng)害能力強(qiáng)等特點(diǎn)。凝集素（lectin）是一類廣泛存在于動(dòng)物、植物和微生物中,調(diào)控著保護(hù)及防御等生物學(xué)過(guò)程。本研究利用分子生物技術(shù),從鹽脅迫的四倍體刺槐中克隆得到一個(gè)凝集素基因TRpL1,通過(guò)熒光定量、原核表達(dá)等方法對(duì)其進(jìn)行了一系列生理生化與分子生物學(xué)研究,得到的結(jié)果如下:（1）利用生物信息學(xué)方法分析TRpL1蛋白的結(jié)構(gòu)特點(diǎn),預(yù)測(cè)了信號(hào)肽、結(jié)構(gòu)域、亞細(xì)胞定位、修飾位點(diǎn)等,發(fā)現(xiàn)其定位在葉綠體或細(xì)胞膜中。（2）構(gòu)建了重組蛋白原核表達(dá)載體pQE-TRpL1,并優(yōu)化了 pQE-TRpL1蛋白的表達(dá)條件,結(jié)果顯示TRpL1蛋白原核表達(dá)的最佳條件是:誘導(dǎo)溫度為28℃,誘導(dǎo)4小時(shí),誘導(dǎo)劑IPTG濃度為0.1 m... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１四倍體刺槐凝集素基因的克隆??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｃｌｏｎｉｎｇ?ｏｆ?ｌｅｃｔｉｎ?ｇｅｎｅ?ｆｒｏｍ?Ｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ?Ｒ．?ｐｓｅｕｄｏａｃａｃｉａ．??

２．３．１四倍體刺槐凝集素基因克隆??利用試劑盒法提取總ＲＮＡ，反轉(zhuǎn)錄合成ｃＤＮＡ后，以ｃＤＮＡ為模板擴(kuò)增得到；基??因（圖２－１?Ａ），與Ｔ載體質(zhì)粒連接，轉(zhuǎn)化。挑取的４個(gè)單菌落ＰＣＲ檢測(cè)，菌落的檢測(cè)結(jié)果??均為顯示陽(yáng)性（圖２－１?Ｂ）。陽(yáng)性菌株測(cè)序獲得一條８５８?ｂｐ的全長(zhǎng)基因，說(shuō)明克隆成??功。??ＤＬ?５０００?１?２?ＤＬ?５０Ｑ０?１２?３?４??＿＿Ｐ＿Ｓ謂３：警麗１１＿＿畫＾?ｒ?覽冒??Ａ?Ｂ??圖２－１四倍體刺槐凝集素基因的克隆??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｃｌｏｎｉｎｇ?ｏｆ?ｌｅｃｔｉｎ?ｇｅｎｅ?ｆｒｏｍ?Ｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ?Ｒ．?ｐｓｅｕｄｏａｃａｃｉａ．??２．３．２?基因生物信息學(xué)分析??（１）?７７？ｐＺＪ進(jìn)化樹(shù)分析??進(jìn)化樹(shù)結(jié)果顯示７７０１７與其他刺槐凝集素親緣關(guān)系最近，推測(cè)它們可能具有類似或同樣??的功能；與百脈根聚為一類，與美國(guó)香槐的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，與菜豆屬的進(jìn)化差異則更大，相??比于其他豆科凝集素有較大距離（圖２－２）。??－１２－??

?１５０?２００??圖２－４?７７０Ｚ／基因編碼蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)??Ｆｉｇｕｒｅ?２－４?Ｐｒｏｔｅｉｎ?Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＴＲｐＬｌ?Ｇｅｎｅ?Ｅｎｃｏｄｉｎｇ??（４）蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)??利用ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)在線預(yù)測(cè)工具對(duì)？?７７？ｐＺＪ基因編碼的蛋白質(zhì)的三級(jí)??結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]擬南芥新基因SI（stress insensitive）參與非生物脅迫應(yīng)答（英文）[J]. 鄒婷,劉喚喚,劉永勝,汪松虎.  應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào). 2018(02)
[2]非生物逆境脅迫下甘蔗CBL1和CBL6基因表達(dá)分析[J]. 凌秋平,曾巧英,吳嘉云,胡斐,李奇?zhèn)?齊永文.  分子植物育種. 2018(02)
[3]鹽脅迫下硝態(tài)氮對(duì)甘薯生長(zhǎng)及滲透調(diào)節(jié)的影響[J]. 李威威,丁效東,劉慶,張德龍,李路瑤,張士榮.  熱帶作物學(xué)報(bào). 2018(01)
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[5]腸桿菌FYP1101對(duì)鹽脅迫下小麥幼苗的促生效應(yīng)[J]. 許芳芳,袁立敏,邵玉芳,范國(guó)花,周心愛(ài),鄭文玲,李冬梅,馮福應(yīng).  微生物學(xué)通報(bào). 2018(01)
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[7]鹽脅迫和水分脅迫對(duì)野生大豆種子萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)的影響[J]. 李為民,李倩,柏國(guó)清,陳昊,李思鋒.  分子植物育種. 2018(01)
[8]植物MAPK級(jí)聯(lián)在逆境脅迫響應(yīng)中的作用研究進(jìn)展[J]. 林俐,吳健.  分子植物育種. 2018(01)
[9]非生物逆境脅迫對(duì)ABA影響的研究現(xiàn)狀[J]. 楊果果,苗彩云,楊喜田.  河南農(nóng)業(yè). 2016(31)
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博士論文
[1]半夏屬植物凝集素和擬南芥SWI-SNF相關(guān)的染色體結(jié)合蛋白基因的鑒定及功能研究[D]. 趙歡.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]碳酸鹽逆境下虎尾草葉片蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D]. 羅秋香.東北林業(yè)大學(xué) 2006
[3]利用裂殖酵母體系，擬南芥鹽脅迫應(yīng)答相關(guān)基因的克隆、鑒定及轉(zhuǎn)基因分析[D]. 唐亞雄.四川大學(xué) 2002

碩士論文
[1]擬南芥JAL30基因的克隆及功能研究[D]. 卞江虎.福建農(nóng)林大學(xué) 2017
[2]水稻OsJRL基因的克隆與分析[D]. 徐魏.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[3]擬南芥類凝集素基因AtLECL1的功能研究[D]. 陳卓.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[4]鹽脅迫下四倍體刺槐的基因表達(dá)及蛋白質(zhì)組學(xué)分析[D]. 劉磊.東北林業(yè)大學(xué) 2012
[5]四倍體刺槐的組培快繁及抗鹽性研究[D]. 王疆江.東北林業(yè)大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3351035