發(fā)布時(shí)間：2021-07-21 01:39

　　橡膠樹轉(zhuǎn)基因改良和高通量基因功能驗(yàn)證,迫切需要高效轉(zhuǎn)基因體系,然而,雖然橡膠樹轉(zhuǎn)基因頻率得到很大提高,但是,轉(zhuǎn)基因篩選效率非常低�；ㄇ嗨厥且环N肉眼直接可辨、簡(jiǎn)單、安全的的轉(zhuǎn)基因篩選標(biāo)記,但是,由于花青素合成調(diào)控基因物種間通用性差、異源表達(dá)花青素累積組織預(yù)期性差和組成型表達(dá)往往影響植物生長(zhǎng)發(fā)育,導(dǎo)致在橡膠樹等植物轉(zhuǎn)基因篩選中尚未廣泛應(yīng)用。為了建立基于花青素累積的橡膠樹轉(zhuǎn)基因篩選系統(tǒng),主要開展如下研究:1.橡膠樹花青素種類和含量分析:采用3mol/l鹽酸水浴的方法,提取橡膠樹體細(xì)胞胚、古銅期、變色期、淡綠期和穩(wěn)定期葉片、暗培養(yǎng)和光照培養(yǎng)幼苗韌皮部等組織的花青素,并進(jìn)行高效液相色譜（HPLC）分析,發(fā)現(xiàn)不同組織均合成一定量花青素,尤其特別的是乳白色胚狀體也累積少量花青素,不同組織花青素均主要以矢車菊素為主。2.花青素累積相關(guān)關(guān)鍵結(jié)構(gòu)基因發(fā)掘:通過轉(zhuǎn)錄組注釋和基因組同源比對(duì),克隆花青素合成代謝途徑結(jié)構(gòu)基因及其同源基因27個(gè),qRT-PCR分析發(fā)現(xiàn),HbCHS、HbF3H、HbF3,H、HbLDOX和HbUFGT表達(dá)量與花青素含量正相關(guān)。3.體細(xì)胞胚花青素累積誘導(dǎo):本研究采用140 mg L-1... 

【文章來源】：海南大學(xué)海南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１橡膠樹不同組織的顏色表型??Ａ：暗培養(yǎng)體胚再生植株；Ｂ：光照培養(yǎng)體胚再生植株；Ｃ：體細(xì)胞胚；Ｄ－Ｇ：自??然條件下生長(zhǎng)的古銅期（Ｄ）、變色期（Ｅ）、淡綠期和穩(wěn)定期（Ｇ）的葉蓬．標(biāo)尺為??

圖４橡膠樹花青素結(jié)構(gòu)基因的克隆??Ｆｉｇ．４?Ｔｈｅ?ｃｌｏｎｅ?ｏｆ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｇｅｎｅ，?ｍａｒｋｅｒ：?ＤＬ２０００??２．２生物進(jìn)化樹的構(gòu)建??橡膠樹關(guān)鍵結(jié)構(gòu)基因系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建，卜：要為ＨＨ、ＬＤＯＸ、ＵＦＧＴ，從ＮＣＢＩ??上：盡可能Ｉ載花青素結(jié)構(gòu)基因的基因序列，用Ｐｒｉｍｅｒ?５軟件轉(zhuǎn)化為氨基酸序列，??用Ｍｅｇａ５軟件構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。??ｐ?Ｄｉｍｏｃａｒｐｕｓ?ｌｏｎｇａｎ??■—?Ｌｉｔｃｈｉ?ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ??＿??Ｍｏｒｎｓ?ｎｏｔａｂｉｌｉｓ???？—?Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ?ｈｉｒｓｕｔｕｍ??ＴＴｉｅｏｂｒｏｍａ?ｃａｃａｏ??Ｈｅ疋ａ?ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ??？?Ｃａｎａｒｉｕｍ?ａｌｂｕｍ??Ｐｙｍｓ?ｃｏｍｍｕｎｉｓ??

片和戊二醛固定的石蠟切片進(jìn)行觀察。結(jié)果表明，在切片中可以看到并不是所有??細(xì)胞都變成紫紅色，并不是所有細(xì)胞都有花青素的積累，變紅的細(xì)胞主要集中在??子葉軸的兩側(cè)。此外變紅細(xì)胞的數(shù)量比在正常條件下培養(yǎng)時(shí)要多的多（圖６）。??圖６外施ＭｅＪＡ巴西橡膠樹體細(xì)胞胚花青素的積累??Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ?ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ?ｉｎ?ｓｏｍａｔｉｃ?ｅｍｂｒｙｏ?ｂｙ?ＪＡ??３６??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]花青素合成轉(zhuǎn)錄因子基因在玉米中的表達(dá)研究:一種新型基因可視化跟蹤表達(dá)系統(tǒng)[J]. 宮硤,楊鳳萍,薛靜,陳緒清,張立全,李向龍,張曉東.  科學(xué)通報(bào). 2012(24)
[2]花青素合成調(diào)節(jié)基因VlmybA2遺傳轉(zhuǎn)化水稻的研究[J]. 楊蕓菲,呂立堂,趙德剛.  貴州大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2012(03)



本文編號(hào)：3294036