具有明確轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的U3和U6啟動(dòng)子是CRISPR/Cas9技術(shù)中驅(qū)動(dòng)sgRNA轉(zhuǎn)錄的重要元件。從毛竹（Phyllostachys edulis）中克隆了2個(gè)PeU3啟動(dòng)子,均進(jìn)行了3個(gè)不同長(zhǎng)度的截短,長(zhǎng)度分別為550、397和149 bp及561、392和152bp;并分別構(gòu)建6個(gè)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的GUS及LUC植物表達(dá)載體,再利用農(nóng)桿菌（Agrobacteriumtumefaciens）介導(dǎo)法分別轉(zhuǎn)化麻竹（Dendrocalamus latiflorus）愈傷組織和煙草（Nicotiana benthamiana）葉片。結(jié)果顯示,這些PeU3啟動(dòng)子總體都具有轉(zhuǎn)錄活性,不同PeU3啟動(dòng)子以及同一PeU3啟動(dòng)子不同截短時(shí)其轉(zhuǎn)錄活性不同,其中長(zhǎng)度為397 bp的PeU3-1-2pro啟動(dòng)子活性最強(qiáng),可為構(gòu)建竹子CRISPR/Cas9基因組編輯體系提供更多理想的內(nèi)源啟動(dòng)子。 

【文章來源】：植物學(xué)報(bào). 2020,55(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

不同截短PeU3啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)報(bào)告基因GUS/LUC的表達(dá)載體構(gòu)建

將不同截短PeU3啟動(dòng)子序列分別與植物表達(dá)載體pCAMBIA1301及pGreenII0800-LUC進(jìn)行同源重組,經(jīng)PCR檢測(cè)后與預(yù)期的目的片段大小相符,則表明不同截短的PeU3啟動(dòng)子與表達(dá)載體pCAMBIA1301及pGreenII0800-LUC構(gòu)建成功。圖3 PeU3啟動(dòng)子序列分析

PeU3啟動(dòng)子序列分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]番茄不同截短U3啟動(dòng)子的克隆及功能分析[J]. 蒲艷,劉曉東,阿爾祖古麗·塔什,魏倩,劉超.  華北農(nóng)學(xué)報(bào). 2019(01)
[2]棉花U3和U6啟動(dòng)子在CRISPR/Cas9基因組編輯體系中的功能鑒定[J]. 藏旭陽,代培紅,李繼洋,蒲艷,顧愛星,劉曉東.  棉花學(xué)報(bào). 2019(01)
[3]毛竹快速生長(zhǎng)期莖稈不同節(jié)間光合色素和光合酶活性的差異[J]. 孫建飛,翟建云,馬元丹,傅盧成,卜柯麗,王柯楊,高巖,張汝民.  植物學(xué)報(bào). 2018(06)
[4]基于棉花U6啟動(dòng)子的海島棉CRISPR/Cas9基因組編輯體系的建立[J]. 李繼洋,雷建峰,代培紅,姚瑞,曲延英,陳全家,李月,劉曉東.  作物學(xué)報(bào). 2018(02)
[5]不同截短U3啟動(dòng)子在棉花中的功能分析[J]. 雷建峰,徐新霞,代培紅,李繼洋,張巨松,劉曉東.  棉花學(xué)報(bào). 2016(03)
[6]棉花不同GbU6啟動(dòng)子截短克隆及功能鑒定[J]. 雷建峰,李月,徐新霞,阿爾祖古麗·塔什,蒲艷,張巨松,劉曉東.  作物學(xué)報(bào). 2016(05)
[7]利用番茄U3snRNA基因上游啟動(dòng)區(qū)構(gòu)建植物表達(dá)載體及對(duì)煙草的轉(zhuǎn)化[J]. 李麗莉,扈廷茂,扈會(huì)平,劉明秋,蘇慧敏.  內(nèi)蒙古大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2005(01)



本文編號(hào)：3257061