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亞洲型舞毒蛾及近緣種遺傳多樣性與快速鑒定研究

發(fā)布時(shí)間:2021-05-09 13:52
  舞毒蛾Lymantria20dispar20(Linnaeus),屬鱗翅目(Lepidoptera)裳蛾科(Erebidae)毒蛾亞科(Lymantriinae),是一種廣泛危害的食葉害蟲(chóng),通常分為歐洲型舞毒蛾和亞洲型舞毒蛾。2009年北美植物保護(hù)組織(NAPPO)正式通過(guò)了第33號(hào)植物衛(wèi)生措施區(qū)域標(biāo)準(zhǔn),對(duì)來(lái)自亞洲型舞毒蛾疫區(qū)的30個(gè)(包括中國(guó))被重點(diǎn)關(guān)注口岸的船舶及貨物實(shí)施特別檢疫措施,對(duì)我國(guó)的出口外貿(mào)帶來(lái)極大的不便。然而我國(guó)對(duì)美貿(mào)易港口主要位于舞毒蛾低密度發(fā)生區(qū),且這些地區(qū)都屬于之前經(jīng)常誤報(bào)舞毒蛾的地區(qū)(因舞毒蛾與其近緣種外形非常相似),所以從總體上來(lái)說(shuō),輸美船舶集裝箱在我國(guó)港口感染舞毒蛾的幾率應(yīng)該排除掉之前誤報(bào)導(dǎo)的舞毒蛾近緣種感染的幾率。因此,研究亞洲型舞毒蛾及其近緣種的基因差異,解決快速種群鑒定問(wèn)題已迫在眉睫,它是解決美國(guó)對(duì)中國(guó)實(shí)施貿(mào)易壁壘的關(guān)鍵因素。鑒于此,本研究以亞洲型舞毒蛾及其在我國(guó)常見(jiàn)的兩種近緣種——模毒蛾和木毒蛾為研究對(duì)象,采用ISSR技術(shù)和線粒體DNA20(mtDNA)20Coxl基因片段對(duì)三種毒蛾的遺傳多樣性進(jìn)行了研究,并利用四段mtDNA序列對(duì)其分子快速鑒定技術(shù)... 

【文章來(lái)源】:北京林業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】:59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【文章目錄】:
摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 亞洲型舞毒蛾概述
        1.1.1 舞毒蛾的分類地位及生物學(xué)特性
        1.1.2 舞毒蛾的危害狀況及其影響
    1.2 舞毒蛾主要近緣種概述
        1.2.1 模毒蛾的生物學(xué)特性及危害現(xiàn)狀
        1.2.2 木毒蛾的生物學(xué)特性及危害現(xiàn)狀
    1.3 舞毒蛾及其近緣種遺傳多樣性研究進(jìn)展
        1.3.1 基于分子標(biāo)記技術(shù)的研究進(jìn)展
            1.3.1.1 RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism)
            1.3.1.2 RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)
            1.3.1.3 AFLP(Amplified Fragment Length Polymorphism)
            1.3.1.4 SSR(Simple Sequence Repeat)
            1.3.1.5 ISSR(Inter Simple Sequence Repeat)
        1.3.2 基于線粒體DNA的研究進(jìn)展
    1.4 研究目的意義與研究?jī)?nèi)容
    1.5 技術(shù)路線
2 基于ISSR-PCR的舞毒蛾及其近緣種遺傳多樣性分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 供試樣品來(lái)源
        2.1.2 舞毒蛾室內(nèi)飼養(yǎng)
        2.1.3 試驗(yàn)所用試劑及其配制
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)所用儀器設(shè)備
    2.2 研究方法
        2.2.1 昆蟲(chóng)基因組DNA提取
        2.2.2 基因組DNA檢測(cè)
            2.2.2.1 DNA純度檢測(cè)
            2.2.2.2 DNA濃度檢測(cè)
        2.2.3 ISSR-PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系的優(yōu)化
        2.2.4 ISSR引物篩選
    2.3 數(shù)據(jù)分析
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 舞毒蛾及其近緣種的野外初步鑒別
            2.4.1.1 形態(tài)特征
            2.4.1.2 采集時(shí)間及采集位置
        2.4.2 ISSR-PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系的建立
            2.4.2.1 dNTP對(duì)ISSR-PCR擴(kuò)增的影響
            2.4.2.2 Mg~(2+)對(duì)ISSR-PCR擴(kuò)增的影響
            2.4.2.3 引物對(duì)ISSR-PCR擴(kuò)增的影響
            2.4.2.4 基因組DNA模板對(duì)ISSR-PCR擴(kuò)增的影響
            2.4.2.5 TaqDNA聚合酶對(duì)ISSR-PCR擴(kuò)增的影響
        2.4.3 ISSR-PCR擴(kuò)增引物的篩選
        2.4.4 遺傳多樣性分析
    2.5 討論
        2.5.1 基因組DNA的提取
        2.5.2 ISSR反應(yīng)體系和條件的優(yōu)化
        2.5.3 舞毒蛾及近緣種遺傳多樣性
3 基于線粒體DNA的舞毒蛾及其近緣種快速鑒定及系統(tǒng)發(fā)育分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 供試樣品
        3.1.2 基因組DNA提取、擴(kuò)增及測(cè)序
        3.1.3 數(shù)據(jù)處理分析與引物設(shè)計(jì)
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 PCR擴(kuò)增、測(cè)序結(jié)果
        3.2.2 特異性引物設(shè)計(jì)及篩選
        3.2.3 Cox1序列片段特征分析
    3.3 討論
4 結(jié)論與展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 展望
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)介
導(dǎo)師簡(jiǎn)介
獲得成果目錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]不同預(yù)處理方法影響昆蟲(chóng)干標(biāo)本DNA提取效果[J]. 李枷霖,鄭斯竹,蔡平,詹國(guó)輝,高淵.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2015(02)
[2]模毒蛾的種群動(dòng)態(tài)與生活史[J]. 張軍生.  林業(yè)科技. 2014(03)
[3]由亞洲型舞毒蛾檢疫問(wèn)題引發(fā)的幾點(diǎn)思考[J]. 諶運(yùn)清,安榆林,劉翔,錢路,顏柳松,胡偉毅,邱建德.  植物檢疫. 2012(04)
[4]5種方法對(duì)蝴蝶干標(biāo)本DNA的提取效果研究[J]. 喬楓,陳振寧,耿貴工,李思未.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(28)
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[6]舞毒蛾線粒體DNA全序列分析[J]. 朱雅君,周國(guó)梁,房蕊,葉軍,易建平.  植物檢疫. 2010(04)
[7]龍眼木毒蛾的生物學(xué)特性[J]. 陳加福.  福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2010(03)
[8]舞毒蛾在阿勒泰地區(qū)的發(fā)生規(guī)律與綜防措施[J]. 崔保成.  農(nóng)村科技. 2010(04)
[9]基于分子遺傳標(biāo)記技術(shù)的舞毒蛾種群遺傳關(guān)系研究進(jìn)展[J]. 周賢,陳乃中,楊定.  植物保護(hù). 2009(05)
[10]舞毒蛾種群分子系統(tǒng)學(xué)初步研究[J]. 周賢,陳巖,楊定,陳乃中.  植物檢疫. 2009(04)

博士論文
[1]天牛科基因條形碼構(gòu)建及分子快速鑒定技術(shù)研究[D]. 鄭斯竹.南京林業(yè)大學(xué) 2012
[2]中國(guó)野生毛木耳遺傳多樣性研究[D]. 杜萍.北京林業(yè)大學(xué) 2011

碩士論文
[1]廈門地區(qū)毒蛾的監(jiān)測(cè)和風(fēng)險(xiǎn)分析[D]. 施宣杰.福建農(nóng)林大學(xué) 2010
[2]秦艽及其近緣種的ISSR和HPLC研究[D]. 張文勇.西北大學(xué) 2010
[3]樟樹(shù)幾種化學(xué)類型及近緣種遺傳多樣性研究[D]. 邢建宏.福建農(nóng)林大學(xué) 2006



本文編號(hào):3177419

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