植物液泡膜H+-ATPase （V-ATPase）是一個多亞基復(fù)合蛋白,在植物中最基本的功能是維持細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的酸堿性內(nèi)平衡狀態(tài)（pH值內(nèi)穩(wěn)態(tài)）和建立跨膜電化學(xué)梯度、為相關(guān)的代謝提供能量。當(dāng)植物處于逆境條件下,V-ATPase在調(diào)控植物響應(yīng)逆境過程的功能具有復(fù)雜性和多樣性。對V-ATPase全酶功能的了解可以通過其關(guān)鍵亞基的深入研究來實(shí)現(xiàn),有研究報(bào)道了其中的a、c、G等亞基的抗逆功能。但鮮有關(guān)于c”亞基的抗逆功能研究的報(bào)道。本研究對檉柳V-ATPase c"亞基基因的表達(dá)和抗逆功能進(jìn)行了初步分析,獲得的結(jié)果如下：對0.4 mol/L NaCl,20% PEG,0.3 mol/L NaHCO3,150 μmol/L CdCl2和100 μmol/L ABA處理后剛毛檉柳根、莖、葉中ThVHAc"1基因的表達(dá)進(jìn)行了分析,結(jié)果顯示該基因能對這些脅迫做出響應(yīng),在脅迫后檉柳各組織中主要表現(xiàn)為上調(diào)表達(dá),在NaCl脅迫24 h的葉中表達(dá)被誘導(dǎo)了8.88倍。在前期研究中已經(jīng)證實(shí)ThVHAc1基因能明顯提高植物的抗逆能力,為了分析ThVHAc"1基因是否也具有抗逆功能,將ThVHAc"1基因轉(zhuǎn)入酵母中,使其... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 引言
    1.2 檉柳抗逆研究概述
    1.3 植物耐鹽調(diào)控研究進(jìn)展
    1.4 V-ATPase研究進(jìn)展
    1.5 本研究的目的與意義
2 檉柳ThVHAc"1基因的表達(dá)模式及亞細(xì)胞定位
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌種與載體
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 溶液配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 ThVHAc"1基因的表達(dá)分析
        2.2.2 ThVHAc"1蛋白的亞細(xì)胞定位
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.3.1 逆境脅迫下ThVHAc"1基因的表達(dá)模式
        2.3.2 ThVHAc"1蛋白的亞細(xì)胞定位
    2.4 本章討論與小結(jié)
3 轉(zhuǎn)ThVHAc"1基因酵母抗逆性分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 菌種和載體
        3.1.2 主要試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 酵母表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.2 重組質(zhì)粒和pYES2質(zhì)粒的酵母轉(zhuǎn)化及鑒定
        3.2.3 重組酵母的逆境脅迫實(shí)驗(yàn)
        3.2.4 重組酵母逆境脅迫下的存活率
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 表達(dá)載體及酵母重組子的獲得
        3.3.2 重組酵母抗逆性分析
    3.4 本章討論與小結(jié)
4 ThVHAc"1基因轉(zhuǎn)擬南芥和瞬時(shí)轉(zhuǎn)化檉柳耐鹽分析
    4.1 植物材料及試劑藥品
        4.1.1 試劑
        4.1.2 載體與菌種
        4.1.3 藥品及培養(yǎng)基配置
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 植物過表達(dá)載體pROK Ⅱ-ThVHAc"1的構(gòu)建
        4.2.2 pROKⅡ-ThVHAc"1轉(zhuǎn)化擬南芥
        4.2.3 轉(zhuǎn)基因擬南芥耐鹽功能分析
        4.2.4 植物抑制表達(dá)載體RNAi：：ThVHAc"1的構(gòu)建
        4.2.5 瞬時(shí)表達(dá)ThVHAc"1的耐鹽功能分析
        4.2.6 數(shù)據(jù)處理與分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 植物過表達(dá)載體pROKⅡ-ThVHAc"1的構(gòu)建
        4.3.2 ThVHAc"1轉(zhuǎn)化擬南芥的篩選
        4.3.3 ThVHAc"1轉(zhuǎn)基因擬南芥的表達(dá)分析
        4.3.4 鹽脅迫下轉(zhuǎn)ThVHAc"1基因擬南芥的發(fā)芽與生長
        4.3.5 ThVHAc"1轉(zhuǎn)基因擬南芥的組織染色
        4.3.6 轉(zhuǎn)ThVHAc"1基因擬南芥的生理表現(xiàn)
    4.4 瞬時(shí)表達(dá)ThVHAc"1基因檉柳耐鹽能力分析
        4.4.1 RNAi：：ThVHAc"1的構(gòu)建
        4.4.2 瞬時(shí)表達(dá)檉柳的獲得
        4.4.3 瞬時(shí)表達(dá)檉柳耐鹽生理途徑分析
    4.5 本章討論與小結(jié)
5 ThVHAc"1基因啟動子克隆和分析
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 植物材料
        5.1.2 菌種與載體
        5.1.3 常用試劑
        5.1.4 藥品及培養(yǎng)基配置
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 檉柳基因組DNA提取
        5.2.2 ThVHAc"1基因的啟動子克隆
        5.2.3 ThVHAc"1上游調(diào)控因子研究
        5.2.4 ThVHAc"1上游調(diào)控基因與順式作用元件的互作驗(yàn)證
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 ThVHAc"1基因啟動子的克隆
        5.3.2 ThVHAc"1上游調(diào)控因子的篩選
    5.4 本章討論與小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[3]NaCl脅迫下馬鈴薯生理生化特性及氮素調(diào)控研究[D]. 張瑞玖.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號：3137329