干旱是植物生長發(fā)育的主要環(huán)境限制因子之一,提高干旱條件下楊樹的生產(chǎn)力是楊樹性狀改良的重要目標(biāo)。因此,深入研究楊樹中調(diào)控抗逆生長發(fā)育的生理與分子機(jī)理有著重要的理論意義和實(shí)踐價(jià)值。本研究以楊樹無性系717-1B4（雌株,Populustremula x P.alba,以下簡稱717）和過表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系（以下簡稱NF-YB8）及空載體轉(zhuǎn)化植株（以下簡稱K-717）為材料,通過土壤水分控制進(jìn)行不同田間持水量干旱脅迫處理,結(jié)合生理生化指標(biāo),研究轉(zhuǎn)NF-YB8基因楊樹對(duì)干旱脅迫的響應(yīng)機(jī)制,為楊樹的抗性育種研究提供重要的基礎(chǔ)理論依據(jù)和基因應(yīng)用資源。主要研究結(jié)果如下:1、成功從毛果楊中克隆出PtNF-YB8基因并建立了完整的遺傳轉(zhuǎn)化體系。2、克隆到的PtNF-YB8基因編碼的蛋白具有螺旋-環(huán)-螺旋二級(jí)結(jié)構(gòu),含有NF-YB蛋白保守結(jié)構(gòu)域和功能氨基酸,結(jié)合模式植物擬南芥NF-Y的基因進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析,預(yù)測楊樹NF-YB8轉(zhuǎn)錄因子可能對(duì)于調(diào)控楊樹抗旱起重要作用。3、通過葉片形態(tài)、相對(duì)含水量以及葉綠素含量分析表明:干旱脅迫下,在田間持水量為50%處理下,NF-YB8株系抗旱性高于717株系和K-717株系。4... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

楊樹NF-YB基因家族成員外顯子-內(nèi)含子結(jié)構(gòu)分析

西北農(nóng)林科技大學(xué)碩士學(xué)位論文22圖3717楊的遺傳轉(zhuǎn)化過程A共培養(yǎng)；B選擇培養(yǎng)；C生成抗性芽；D完整的抗性植株Fig.3Genetictransformationofpoplar717在選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)2-3周后，葉片變成透明狀，葉片有機(jī)質(zhì)被消耗殆盡，在傷口處已經(jīng)形成誘導(dǎo)芽（圖3B）。在選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-5周后，部分葉片表面會(huì)長出許多不定芽（圖3C），當(dāng)不定芽長度為1-2cm時(shí)，剪下不定芽移至生根培養(yǎng)基中（含30mg/LKan）繼續(xù)進(jìn)行篩選，約3周左右生根形成完整幼苗（圖3D）。篩選出的抗性芽從生根長至具有5-7片真葉的完整植株所需時(shí)間約為6-8周。本實(shí)驗(yàn)中，我們初步得到了轉(zhuǎn)NF-YB8基因的5個(gè)轉(zhuǎn)化再生株系。將轉(zhuǎn)化過程中得到的具有Kan抗性的組培苗進(jìn)行快速擴(kuò)繁用于PCR檢測，以進(jìn)行陽性驗(yàn)證。ABCD

第三章PtNF-YB8基因克隆及遺傳轉(zhuǎn)化233.4.2NF-YB8過表達(dá)植株的PCR檢測圖4轉(zhuǎn)NF-YB8基因植株的PCR檢測結(jié)果1-5：轉(zhuǎn)NF-YB8基因植株；6：DLMaker2000；7：717楊陰性對(duì)照；8：清水空白對(duì)照；9：NF-YB8質(zhì)粒陽性對(duì)照Fig.4ThePCRresultsoftransgenicNF-YB8plants1-5：TransgenicNF-YB8Plant；6：DLMaker2000；7：717negativecontrols；8：WaterControl；9：NF-YB8plasmid-positivecontrols將經(jīng)過Kan+初步篩選得到的轉(zhuǎn)NF-YB8基因植株幼苗和717楊幼苗提取總RNA，隨即進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄得到各株系的cDNA。以轉(zhuǎn)基因楊樹各株系的總cDNA為模板，含NF-YB8基因所對(duì)應(yīng)的質(zhì)粒為陽性對(duì)照，陰性對(duì)照為清水（無菌）和717楊的總cDNA，然后用預(yù)先設(shè)計(jì)好的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。圖4的PCR結(jié)果顯示，清水和717楊無任何條帶擴(kuò)出；NF-YB8基因質(zhì)粒在566bp處有明顯的目的條帶；得到的轉(zhuǎn)基因植株中只有4個(gè)株系擴(kuò)增出566bp的條帶，這與預(yù)期目的條帶的大小一致。由此結(jié)果可初步判斷已經(jīng)將目的基因片段導(dǎo)入這4個(gè)株系中。


本文編號(hào)：3124892