干旱是植物生長發(fā)育的主要環(huán)境限制因子之一,提高干旱條件下楊樹的生產(chǎn)力是楊樹性狀改良的重要目標。因此,深入研究楊樹中調控抗逆生長發(fā)育的生理與分子機理有著重要的理論意義和實踐價值。本研究以楊樹無性系717-1B4（雌株,Populustremula x P.alba,以下簡稱717）和過表達轉基因株系（以下簡稱NF-YB8）及空載體轉化植株（以下簡稱K-717）為材料,通過土壤水分控制進行不同田間持水量干旱脅迫處理,結合生理生化指標,研究轉NF-YB8基因楊樹對干旱脅迫的響應機制,為楊樹的抗性育種研究提供重要的基礎理論依據(jù)和基因應用資源。主要研究結果如下:1、成功從毛果楊中克隆出PtNF-YB8基因并建立了完整的遺傳轉化體系。2、克隆到的PtNF-YB8基因編碼的蛋白具有螺旋-環(huán)-螺旋二級結構,含有NF-YB蛋白保守結構域和功能氨基酸,結合模式植物擬南芥NF-Y的基因進行系統(tǒng)進化分析,預測楊樹NF-YB8轉錄因子可能對于調控楊樹抗旱起重要作用。3、通過葉片形態(tài)、相對含水量以及葉綠素含量分析表明:干旱脅迫下,在田間持水量為50%處理下,NF-YB8株系抗旱性高于717株系和K-717株系。4... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

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楊樹NF-YB基因家族成員外顯子-內含子結構分析

西北農(nóng)林科技大學碩士學位論文22圖3717楊的遺傳轉化過程A共培養(yǎng)；B選擇培養(yǎng)；C生成抗性芽；D完整的抗性植株Fig.3Genetictransformationofpoplar717在選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)2-3周后，葉片變成透明狀，葉片有機質被消耗殆盡，在傷口處已經(jīng)形成誘導芽（圖3B）。在選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-5周后，部分葉片表面會長出許多不定芽（圖3C），當不定芽長度為1-2cm時，剪下不定芽移至生根培養(yǎng)基中（含30mg/LKan）繼續(xù)進行篩選，約3周左右生根形成完整幼苗（圖3D）。篩選出的抗性芽從生根長至具有5-7片真葉的完整植株所需時間約為6-8周。本實驗中，我們初步得到了轉NF-YB8基因的5個轉化再生株系。將轉化過程中得到的具有Kan抗性的組培苗進行快速擴繁用于PCR檢測，以進行陽性驗證。ABCD

第三章PtNF-YB8基因克隆及遺傳轉化233.4.2NF-YB8過表達植株的PCR檢測圖4轉NF-YB8基因植株的PCR檢測結果1-5：轉NF-YB8基因植株；6：DLMaker2000；7：717楊陰性對照；8：清水空白對照；9：NF-YB8質粒陽性對照Fig.4ThePCRresultsoftransgenicNF-YB8plants1-5：TransgenicNF-YB8Plant；6：DLMaker2000；7：717negativecontrols；8：WaterControl；9：NF-YB8plasmid-positivecontrols將經(jīng)過Kan+初步篩選得到的轉NF-YB8基因植株幼苗和717楊幼苗提取總RNA，隨即進行反轉錄得到各株系的cDNA。以轉基因楊樹各株系的總cDNA為模板，含NF-YB8基因所對應的質粒為陽性對照，陰性對照為清水（無菌）和717楊的總cDNA，然后用預先設計好的引物進行PCR擴增。圖4的PCR結果顯示，清水和717楊無任何條帶擴出；NF-YB8基因質粒在566bp處有明顯的目的條帶；得到的轉基因植株中只有4個株系擴增出566bp的條帶，這與預期目的條帶的大小一致。由此結果可初步判斷已經(jīng)將目的基因片段導入這4個株系中。


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