本研究以河北楊（Populus hopeiensis Hu et Chow）1年生嫩枝為外植體,通過對不同培養(yǎng)階段最佳培養(yǎng)基與生長調(diào)節(jié)劑濃度的篩選,建立了河北楊的高效再生體系。并在此基礎(chǔ)上,以河北楊無菌苗葉片為受體材料,利用農(nóng)桿菌介導法轉(zhuǎn)化WOX基因,對影響轉(zhuǎn)化效率的主要因素進行了研究,為河北楊提供高效、安全、規(guī)模化遺傳轉(zhuǎn)化改良平臺,也為其他楊樹遺傳轉(zhuǎn)化培育新品種及相關(guān)基因功能研究提供理論和技術(shù)參考。主要研究結(jié)果如下:1.河北楊再生體系的建立:最佳消毒方法為先用75%酒精消毒30 s,再用0.1%升汞消毒12 min,消毒效果最好,污染率最低為10%,死亡率為13.33%;莖段誘導腋芽最佳培養(yǎng)基為1/2MS+0.5 mg·L-1 6-BA+0.05 mg·L-1 NAA,腋芽萌發(fā)時間為7d,誘導率為95%;最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.3 mg·L-1 IBA+0.05mg·L-1 NAA,生根率達100%;煉苗移栽基質(zhì)配比為草炭土:蛭石:珍珠巖=6:3:1（v/v/v）,成活率達93.7%。2.河北楊遺傳轉(zhuǎn)化受體體系的建立:葉片誘導不定芽最佳培養(yǎng)基為MS+0.3 mg·L-1 TD... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２?５號培養(yǎng)基中腋芽的誘導情況??Ｆｉｇ．２?ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ａｘｉｌｌａｒｙ?ｂｕｄｓ?ｉｎ?ｍｅｄｉｕｍ?５??

圖４無菌苗移栽??Ｆｉｇ．４?ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ?ｏｆ?ｓｔｅｒｉｌｅ?ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ??

?內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文?２３??圖５?８號培養(yǎng)基中不定芽的誘導情況??Ｆｉｇ．５?ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ?ｂｕｄｓ?ｉｎ?ｍｅｄｉｕｍ?８??注：Ａ．培養(yǎng)１５?ｄ的不定芽；Ｂ．培養(yǎng)２５?ｄ的不定芽；Ｃ．培養(yǎng)３５?ｄ的不定芽??Ａ．?ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ?ｂｕｄｓ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｆｏｒ?１５?ｄａｙｓ；?Ｂ．?ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ?ｂｕｄｓ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｆｏｒ?２５?ｄａｙｓ；?Ｃ．?ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ?ｂｕｄｓ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ??ｆｏｒ?３５?ｄａｙｓ??３．２．２不同濃度潮霉素對葉片誘導不定芽的影響??不同濃度潮霉素處理試驗結(jié)果如表６所示，葉片對潮霉素非常敏感，隨著潮霉素??的濃度的升高葉片分化率降低，平均不定芽數(shù)變少；潮霉素濃度１．０?ｍ＾Ｉ／１時，分化??率達到７０％，葉色淺綠，不定芽較少，長勢較好（圖５．Ａ）；潮霉素濃度為２．０?ｍｇ＊�。唬�??時，葉色黃綠，不定芽少，長勢弱（圖５．Ｂ）；當潮霉素濃度為Ｓ．Ｏｍｇ＊��；１時，在邊緣??可見分化芽（圖５．Ｃ）；當潮霉素濃度增加至５．０?ｍｐＬ—１時，沒有芽點且大部分葉片都??褐化死亡（圖５．Ｄ）。因此，避免潮霉素濃度過低產(chǎn)生大量的假陽性苗或者因其濃度??過高導致?lián)p傷轉(zhuǎn)化細胞，本實驗選擇潮霉素濃度為３．０?。??表６不同濃度潮霉素對葉片誘導不定芽的影響??Ｔａｂｌｅ．?６?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ?ｏｎ?ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ?ｂｕｄｓ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ｌｅａｖｅｓ??１霉素／ｍｇ＊�。唬�?外植體數(shù)／個?分化率／％?不定芽生

【參考文獻】：
期刊論文
[1]中紅楊離體葉片植株再生體系建立[J]. 孫紅英,辛全偉,馬志慧,蘭思仁.  中南林業(yè)科技大學學報. 2019(04)
[2]植物組織培養(yǎng)技術(shù)的現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢[J]. 陳紅.  生物化工. 2018(05)
[3]河北楊繁育技術(shù)初探[J]. 趙平.  山西林業(yè)科技. 2017(02)
[4]大青楊再生體系的優(yōu)化[J]. 姜洋,劉煥臻,李開隆.  東北林業(yè)大學學報. 2017(04)
[5]轉(zhuǎn)Bt基因歐洲黑楊轉(zhuǎn)化TA29-Barnase基因的研究[J]. 朱偉康,賈小明,李周岐.  西北林學院學報. 2017(01)
[6]河北楊扦插育苗技術(shù)[J]. 楊曉梅.  農(nóng)技服務(wù). 2016(12)
[7]青皮河北楊繁育及造林技術(shù)[J]. 朱虎山.  南方農(nóng)業(yè). 2016(15)
[8]甜楊葉片高頻率植株再生體系的建立[J]. 趙鑫聞.  中國農(nóng)學通報. 2015(34)
[9]小黑楊快繁與再生體系的優(yōu)化[J]. 杜兆偉,鄭唐春,李爽,臧麗娜,曲冠證,由香玲.  植物研究. 2015(06)
[10]Establishment of high frequency shoot regeneration system in Himalayan poplar（Populus ciliata Wall. ex Royle） from petiole explants using Thidiazuron cytokinin as plant growth regulator[J]. G. Aggarwal,A. Gaur,D. K. Srivastava.  Journal of Forestry Research. 2015(03)

博士論文
[1]BtCry1A基因轉(zhuǎn)化中嘉8號楊的研究[D]. 鄭進.華中師范大學 2006
[2]胡楊再生體系的建立及rolB-pttGA20ox基因的遺傳轉(zhuǎn)化研究[D]. 丁霞.北京林業(yè)大學 2006

碩士論文
[1]四種楊樹組培和再生體系的建立[D]. 馬寧.山西農(nóng)業(yè)大學 2015
[2]84K楊再生和遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究[D]. 周熙瑩.東北林業(yè)大學 2013
[3]小葉楊雜種再生體系建立及農(nóng)桿菌介導遺傳轉(zhuǎn)化體系的初步研究[D]. 付文鋒.北京林業(yè)大學 2012
[4]兩個楊樹無性系再生體系的建立及抗蟲基因Cry1C+9C轉(zhuǎn)化的初步研究[D]. 盧小三.華中農(nóng)業(yè)大學 2010
[5]三種楊樹再生體系的建立及青海青楊遺傳轉(zhuǎn)化的研究[D]. 杜曉艷.西南大學 2010
[6]丹紅楊和巨尾桉組織培養(yǎng)技術(shù)的研究[D]. 蔣淑磊.中南林業(yè)科技大學 2009
[7]黑楊派無性系SN05-11和LN05-51再生體系的研究[D]. 程云.華中農(nóng)業(yè)大學 2009
[8]山地楊的組織培養(yǎng)和快速繁殖的研究[D]. 汪建亞.華中農(nóng)業(yè)大學 2003
[9]毛白楊木質(zhì)素合成相關(guān)基因分離和轉(zhuǎn)基因楊樹植株獲得[D]. 趙華燕.新疆農(nóng)業(yè)大學 2001



本文編號：3105924