WRKY家族基因是近些年來研究較為廣泛的一類植物轉(zhuǎn)錄因子,它在高等植物中存在較廣,在低等植物中很少發(fā)現(xiàn)。WRKY家族成員不僅可以參與植物的多種生物學(xué)過程,如代謝調(diào)控、形態(tài)建成、種子萌發(fā)等,在生物和非生物脅迫條件下也會不同程度被誘導(dǎo),表明了在植物防衛(wèi)反應(yīng)中WRKY蛋白扮演著不可或缺的角色。本研究克隆白樺WRKY家族基因及其啟動子,研究其表達(dá)特性,篩選和抗逆性及材性相關(guān)的WRKY家族成員,進(jìn)行功能研究,為林木分子生物學(xué)提供基礎(chǔ)理論,為培育速生、優(yōu)質(zhì)、高抗白樺新品種提供材料。本研究在前期構(gòu)建的白樺轉(zhuǎn)錄組中查找到131條WRKY基因,利用NCBI網(wǎng)站中的blastx程序進(jìn)行比對分析,最終確定37條具有完整開放讀碼框（ORF）的白樺WRKY基因序列,利用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增,成功克隆得到20條白樺WRKY基因,并對其進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。結(jié)果表明它們都含有高度保守的WRKY氨基酸結(jié)構(gòu)域,并且很多都與擬南芥中的AtWRKY遺傳進(jìn)化關(guān)系較近。利用實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)研究了白樺WRKY家族基因在白樺不同組織及不同非生物脅迫下不同時間點(diǎn)的基因表達(dá)模式,結(jié)果表明這些基因在不同組織中的表達(dá)是具有特異性的,在... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１白樺ＷＲＫＹ家族基因保守區(qū)預(yù)測??表２－６白樺ＷＲＫＹ家族基因蛋白質(zhì)性質(zhì)??

?東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文???２．３．２．４白樺ＷＲＫＹ家族基因系統(tǒng)進(jìn)化分析??此外，還對２０條白樺辦基因推導(dǎo)的蛋白序列和７１條擬南芥Ａ奶況ｒ基因??的蛋白序列進(jìn)行了系統(tǒng)進(jìn)化樹分析（圖２－３）。結(jié)果表明你與的遺傳??進(jìn)化關(guān)系較近；卵／股尺｝３５與＾４／哪尤７￥４的遺傳進(jìn)化關(guān)系較近；你／膽尤７２５與??／１／Ｗ７？ＡＴ５７的遺傳進(jìn)化關(guān)系較近；辦／＾ｉＱ７２與的遺傳進(jìn)化關(guān)系較近；??％脈尺與乂爾尺削的遺傳進(jìn)化關(guān)系較近；辦脈燈２５與Ｊ戯燈２７的遺傳進(jìn)化??關(guān)系較近；印／階？尤７２５與淪的遺傳進(jìn)化關(guān)系較近；辦／階？尺｝＾與淪奶？ＫＦ（５５的??遺傳進(jìn)化關(guān)系較近；辦／階？尤７（５與Ａ階？／０７５的遺傳進(jìn)化關(guān)系較近。??＿＿??ＡｔＷＲＫＹ７４?＾?Ｈ?Ｌ—ＣＺＺＩ—：——ＡｔＷＲＫＹ５７??°?５?°??圖２－３白樺ＷＲＫＹ家族基因系統(tǒng)進(jìn)化分析??－３０－??

２白樺ＷＲＫＹ家族基因克隆及表達(dá)分析??２．３．３白樺ＷＲＫＹ家族基因響應(yīng)非生物脅迫研究??以未脅迫處理的野生型白樺為對照，對用２００?ｍｍｏｌ／Ｌ?ＮａＣｌ和３００?ｍｍｏｌ／Ｌ甘露醇??（Ｍａｎｎｉｔｏｌ）分別脅迫處理６?ｈ、１２?ｈ、２４?ｈ和４８?ｈ四個不同時間點(diǎn)的２０條白樺財(cái)夂Ｆ??基因的表達(dá)量進(jìn)行分析，結(jié)果見圖２－５。結(jié)果顯示在２０條白樺陳火Ｆ基因中，只有??辦／的？尺汾基因在兩種脅迫的不同時間點(diǎn)均上調(diào)表達(dá)，其余１９條白樺基因在各??個時間點(diǎn)均下調(diào)表達(dá)。在２００?ｍｍｏｌ／Ｌ?ＮａＣｌ的脅迫處理中，２０條白樺ＷＲＫＹ家族基因??隨著脅迫處理時間的增長，其基因表達(dá)量變化的總體表達(dá)趨勢是先下降后又有所恢復(fù)，??在脅迫處理２４?ｈ左右達(dá)到其表達(dá)量的最低值。在３００?ｍｍｏｌ／Ｌ?Ｍａｎｎｉｔｏｌ的脅迫處理中，??２０條白樺ＷＲＫＹ家族基因隨著脅迫處理時間的增長，其基因表達(dá)量變化的總體表達(dá)趨??勢表現(xiàn)為有所恢復(fù)而后繼續(xù)下降，在脅迫處理６?ｈ左右表達(dá)量最低。除此之外還可以看??出，基因在兩種脅迫處理的各個時間點(diǎn)表達(dá)量相對穩(wěn)定，差異不大，且在２０??條白樺基因中下調(diào)表達(dá)最為明顯。??圖２－４脅迫處理后白樺材料ＲＮＡ提収檢測電泳圖??注：Ａ：未處理野生型白樺ＲＮＡ；?Ｂ：?２００?ｍｍｏｌ／Ｌ?ＮａＣ丨脅迫處理６?ｈ后白樺ＲＮＡ；?Ｃ：?２００?ｍｍｏｌ／Ｌ??ＮａＣｌ?脅迫處理?１２?ｈ?后白樺?ＲＮＡ；?Ｄ：?２００?ｍｍｏｌ／Ｌ?ＮａＣｌ?脅迫處理?２４?ｈ?后白樺?ＲＮＡ；?Ｅ：?２００?ｍ．ｍｏ．ｌ／Ｌ??ＮａＣ丨脅迫處理４８?ｈ后白樺ＲＮＡ；?Ｆ：?３００?ｍｍｏｌ／Ｌ?Ｍａｎｎｉｔｏ丨脅迫處理６?ｈ后白樺ＲＮＡ；

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]毛竹抗逆相關(guān)基因PeZFP和PeMYB基因的克隆及PeZFP基因功能驗(yàn)證[D]. 楊麗.浙江農(nóng)林大學(xué) 2011
[3]轉(zhuǎn)基因白樺中外源基因整合表達(dá)穩(wěn)定性與遺傳變異分析[D]. 曾凡鎖.東北林業(yè)大學(xué) 2005



本文編號：3090926