利用基因組原位雜交（Genomic in situ hybridization,GISH）技術(shù),以白杄基因組DNA作探針DNA紅皮云杉基因組DNA作封阻DNA和紅皮云杉基因組DNA作探針DNA白桿基因組DNA作封阻DNA,對(duì)沙地云杉中期染色體進(jìn)行基因組原位雜交鑒定,分析三種云杉基因組間的親緣關(guān)系,并進(jìn)行核型分析,同時(shí)對(duì)試驗(yàn)技術(shù)進(jìn)行了優(yōu)化研究。結(jié)果表明:1.上午9:00～10:00取的根尖出現(xiàn)中期染色體細(xì)胞數(shù)目比下午2:00～3:00的多,可能與細(xì)胞分裂旺盛有關(guān);根尖用0.1%秋水仙素和1%二甲基亞楓混合液置于搖床23℃、115rpm的暗條件下處理6.5h,分裂中期細(xì)胞較多,形態(tài)良好;用現(xiàn)配2%纖維素酶和1%果膠酶混合液在37℃條件下進(jìn)行酶解70min,染色體分散效果較好;探針DNA及封阻DNA制備中高壓滅菌3min時(shí)的基因組DNA片段長(zhǎng)度集中在200～500bp之間,是云杉屬植物原位雜交所需的探針DNA和封阻DNA最佳片段大小。2.白桿基因組DNA在沙地云杉14條染色體上有雜交信號(hào),分別為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、13、14、19和20號(hào)染色體;紅皮云杉基因組DNA在沙... 

【文章來(lái)源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：37 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 云杉屬概述
    1.2 沙地云杉概述
        1.2.1 沙地云杉形態(tài)學(xué)特征
    1.3 沙地云杉近緣種概述
        1.3.1 紅皮云杉
        1.3.2 白桿
    1.4 基因組原位雜交技術(shù)
    1.5 基因組原位雜交（GISH）技術(shù)的研究進(jìn)展
    1.6 研究目的與意義
    1.7 技術(shù)路線
2 試驗(yàn)材料和方法
    2.1 試驗(yàn)材料
    2.2 主要儀器設(shè)備
    2.3 主要試劑
    2.4 試驗(yàn)方法
        2.4.1 染色體制片
        2.4.2 核型分析
        2.4.3 探針DNA及封阻DNA的制備
        2.4.4 基因組原位雜交
3 結(jié)果與分析
    3.1 染色體制片取材時(shí)間的篩選
    3.2 染色體制片技術(shù)優(yōu)化
        3.2.1 預(yù)處理?xiàng)l件的篩選
        3.2.2 酶解條件篩選
    3.3 基因組DNA提取效果
    3.4 基因組DNA剪切效果
        3.4.1 高壓滅菌剪切法
        3.4.2 超聲波剪切法
    3.5 三種云杉的染色體核型分析
    3.6 基因組原位雜交結(jié)果
        3.6.1 白杄基因組DNA在沙地云杉中期染色體上的原位雜交結(jié)果
        3.6.2 紅皮云杉基因組DNA在沙地云杉中期染色體上的原位雜交結(jié)果
4 討論
    4.1 取材時(shí)間與細(xì)胞分裂時(shí)相關(guān)系
    4.2 預(yù)處理液對(duì)染色體制片的影響
    4.3 影響基因組原位雜交結(jié)果的因素
    4.4 三種云杉的親緣關(guān)系
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3085193