毒液作為寄生蜂調(diào)控寄主的重要作用物,有關(guān)其生理功能的研究主要集中在繭蜂科和姬蜂科,且迄今僅極少數(shù)的寄生蜂毒液蛋白生理功能被探明。有鑒于此,本研究以隸屬于腫腿蜂科的管氏腫腿蜂Scleroderma guani為研究對(duì)象,在研究該蜂毒液生理功能的同時(shí),對(duì)該蜂毒液金屬蛋白酶及絲氨酸蛋白酶基因進(jìn)行了克隆,并對(duì)其生理功能進(jìn)行了系統(tǒng)研究。結(jié)果如下:經(jīng)寄生和體外注射毒液的方法研究發(fā)現(xiàn),管氏腫腿蜂毒液能麻痹寄主黃粉甲蛹,抑制寄主生長(zhǎng)發(fā)育,并降低寄主羽化率。此外,該蜂毒液能引起寄主體內(nèi)血細(xì)胞總數(shù)、顆粒血細(xì)胞和漿血細(xì)胞數(shù)量增加,抑制寄主顆粒血細(xì)胞及漿血細(xì)胞的延展,導(dǎo)致寄主血細(xì)胞的死亡,抑制寄主血淋巴酚氧化酶的活性。采用RT-PCR技術(shù),克隆獲得的管氏腫腿蜂毒液金屬蛋白酶基因和絲氨酸蛋白酶基因,其開放閱讀框分別為1872 bp和798 bp,編碼623個(gè)和265個(gè)氨基酸,理論分子量分別為71.84 kDa和30.53 kDa。進(jìn)化樹分析表明,管氏腫腿蜂毒液金屬蛋白酶隸屬于gluzincin超家族中的M13家族,明顯有別于已報(bào)道的其他寄生蜂毒液金屬蛋白酶隸屬于metzincin超家族中的M12家族。熒光定量P... 

【文章來(lái)源】：西南林業(yè)大學(xué)云南省

【文章頁(yè)數(shù)】：87 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 前言
    1.1 寄生蜂毒液的生化特性
    1.2 寄生蜂毒液蛋白組分
        1.2.1 酶類
        1.2.2 麻痹素
        1.2.3 抗菌物質(zhì)
        1.2.4 抑制劑
        1.2.5 其他毒液成分
    1.3 寄生蜂毒液的生理功能
        1.3.1 對(duì)寄主生長(zhǎng)發(fā)育的調(diào)控
        1.3.2 對(duì)寄主的麻痹作用
        1.3.3 對(duì)寄主體液免疫的調(diào)控
        1.3.4 對(duì)寄主細(xì)胞免疫的調(diào)控
        1.3.5 毒液的其他作用
    1.4 研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 供試?yán)ハx
        2.1.2 菌種和質(zhì)粒
        2.1.3 試劑、試劑盒及工具酶
        2.1.4 主要溶液及配制
        2.1.5 SDS-PAGE電泳試劑
        2.1.6 Westernblot主要試劑
        2.1.7 培養(yǎng)基
        2.1.8 設(shè)備及儀器
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 管氏腫腿蜂和黃粉甲
        2.2.2 毒液蛋白制備
        2.2.3 寄生
        2.2.4 毒液微量注射
        2.2.5 毒液生理功能
        2.2.6 管氏腫腿蜂毒液金屬蛋白酶及絲氨酸蛋白酶基因的克隆
        2.2.7 基因測(cè)序及序列分析
        2.2.8 管氏腫腿蜂毒液金屬蛋白酶及絲氨酸蛋白酶基因表達(dá)特征
        2.2.9 毒液基因原核表達(dá)
        2.2.10 毒液基因原核表達(dá)產(chǎn)物生理功能
        2.2.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 管氏腫腿蜂毒液的生理功能
        3.1.1 對(duì)寄主的麻痹作用
        3.1.2 對(duì)寄主生長(zhǎng)發(fā)育的影響
        3.1.3 對(duì)寄主細(xì)胞免疫的影響
        3.1.4 對(duì)寄主體液免疫的影響
    3.2 金屬蛋酶與絲氨酸蛋白基因的序列分析
    3.3 管氏腫腿蜂毒液金屬蛋白酶及絲氨酸蛋白酶基因的表達(dá)特征
        3.3.1 金屬蛋白酶基因
        3.3.2 絲氨酸蛋白酶基因
    3.4 管氏腫腿蜂毒液金屬蛋白酶和絲氨酸蛋白酶基因的原核表達(dá)
        3.4.1 金屬蛋白酶
    3.5 管氏腫腿蜂毒液金屬蛋白酶的生理功能
        3.5.1 對(duì)寄主的麻痹作用
        3.5.2 對(duì)寄主生長(zhǎng)發(fā)育的影響
        3.5.3 對(duì)寄主細(xì)胞免疫的影響
        3.5.4 對(duì)寄主體液免疫的影響
    3.6 管氏腫腿蜂毒液絲氨酸蛋白酶生理功能
        3.6.1 對(duì)寄主的麻痹作用
        3.6.2 對(duì)寄主生長(zhǎng)發(fā)育的影響
        3.6.3 對(duì)寄主細(xì)胞免疫的影響
        3.6.4 對(duì)寄主體液免疫的影響
4. 討論與結(jié)論
    4.1 討論
        4.1.1 管氏腫腿蜂毒液生理功能
        4.1.2 管氏腫腿蜂毒液金屬蛋白酶與絲氨酸蛋白酶基因序列及表達(dá)
        4.1.3 管氏腫腿蜂毒液金屬蛋白酶與絲氨酸蛋白酶生理功能
    4.2 結(jié)論
5 創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)介
導(dǎo)師簡(jiǎn)介
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[3]麗蠅蛹集金小蜂毒液蛋白組分的鑒定及PACIFASTIN類和KAZAL類基因的功能分析[D]. 錢岑.浙江大學(xué) 2013
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[6]蝶蛹金小蜂寄生對(duì)菜粉蝶蛹細(xì)胞免疫與生理代謝的影響[D]. 張倩倩.浙江大學(xué) 2009
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[8]頸雙緣姬蜂調(diào)控寄主小菜蛾的生理機(jī)制研究[D]. 酈衛(wèi)弟.浙江大學(xué) 2005
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碩士論文
[1]家蠶絲氨酸蛋白酶BmSP125在表皮發(fā)育過(guò)程中的功能研究[D]. 陳建平.西南大學(xué) 2013
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[3]川硬皮腫腿蜂毒液性質(zhì)及其對(duì)黃粉蟲蛹的麻痹和營(yíng)養(yǎng)代謝的影響[D]. 覃歡.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[4]菜蛾盤絨繭蜂Cotesia vestalis毒液和萼液對(duì)寄主小菜蛾P(guān)lutella xylostella幼蟲的免疫調(diào)控研究[D]. 曹婷婷.浙江大學(xué) 2008
[5]半閉彎尾姬蜂對(duì)寄主小菜蛾生理特性的影響[D]. 蔣蕓蕓.杭州師范大學(xué) 2007
[6]菜蛾盤絨繭蜂毒液對(duì)寄主小菜蛾生理調(diào)控機(jī)制的研究[D]. 俞瑞鮮.浙江大學(xué) 2006
[7]麗蠅蛹集金小蜂毒液性質(zhì)及其寄生的生理學(xué)效應(yīng)[D]. 張燾.浙江大學(xué) 2003



本文編號(hào)：3046859