長白落葉松具有抗逆性強(qiáng)及早期速生等優(yōu)點(diǎn),為北半球溫帶山區(qū)與寒帶氣候條件下重要的速生用材樹種,具有很高的生態(tài)價(jià)值與經(jīng)濟(jì)價(jià)值。但長白落葉松雜合性高、有性生殖產(chǎn)生的子代變異較大,而扦插及不定芽再生途徑等無性繁殖方式也存在生根率較低、成苗困難等問題,通過傳統(tǒng)的育種方法無法滿足快速遺傳改良的需求。因此,本研究以長白落葉松未成熟合子胚為外植體誘導(dǎo)胚性愈傷組織,建立并優(yōu)化了體細(xì)胞胚胎發(fā)生體系、胚性愈傷組織的懸浮培養(yǎng)體系及農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系,并在此基礎(chǔ)上,對(duì)處于不同發(fā)育階段的體細(xì)胞胚的理化特性進(jìn)行了初步研究。主要研究結(jié)果如下:（1）長白落葉松授粉70天后采集的合子胚適合誘導(dǎo)胚性愈傷組織,基本培養(yǎng)基為BM,添加2,4-D 1.5 mg·L^-1、BA 0.5 mg·L^-1及KT 0.5 mg·L^-1,且不同無性系間的誘導(dǎo)率存在一定差異。（2）胚性愈傷組織在含2,4-D 0.3 mg·L^-1、BA 0.1 mg·L^-1及KT 0.1 mg·L^-1的BM培養(yǎng)基中可迅速增殖并... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：154 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

針葉樹的體細(xì)胞胚胎發(fā)生過程

探討長白落葉松胚性愈傷組織對(duì) 3 種抗生素的敏感性，并在此基礎(chǔ)上農(nóng)桿菌及基因槍介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化研究，建立遺傳轉(zhuǎn)化體系并對(duì)轉(zhuǎn)化條件進(jìn)行，為長白落葉松的遺傳發(fā)育機(jī)制研究及分子育種奠定基礎(chǔ)。.1 材料與方法.1.1 試驗(yàn)材料.1.1.1 植物材料以長白落葉松胚性細(xì)胞系為研究對(duì)象，取增殖培養(yǎng)約 14 天的新鮮胚性愈織為植物材料進(jìn)行試驗(yàn)。.1.1.2 菌種與質(zhì)粒本研究所用大腸桿菌菌株所含質(zhì)粒帶有 β-葡萄糖苷酶（GUS）基因、潮霉酸轉(zhuǎn)移酶基因（hpt）以及壯觀霉素抗性基因（aadA）等選擇標(biāo)記基因，由林業(yè)大學(xué)林木遺傳育種國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室李成浩教授提供。

6.2.9 基因槍介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化的結(jié)果通過基因槍介導(dǎo)長白落葉松胚性愈傷組織的轉(zhuǎn)化，沒有獲得瞬時(shí)或穩(wěn)定表達(dá)外源基因的抗性組織。推測(cè)這可能和基因槍介導(dǎo)外源基因整合的特點(diǎn)有關(guān)。外源基因在外力的作用下雖然能夠進(jìn)入多數(shù)受體細(xì)胞，但整合困難；即便成功整合到受體基因組中也常會(huì)發(fā)生基因重排或丟失，導(dǎo)致外源基因在轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄后水平的沉默。因此，在后續(xù)的研究中還需對(duì)轉(zhuǎn)化方法進(jìn)行改進(jìn)，如改善受體組織的生理狀態(tài)、改變微載體的種類與顆粒大小、調(diào)節(jié)破裂盤與載體膜的距離及受體組織與終止屏的距離等。6.2.10 抗性組織的 PCR 檢測(cè)結(jié)果從獲得的 Hyg 抗性細(xì)胞系中隨機(jī)挑選 16 個(gè)，提取總 DNA 作模板進(jìn)行 PCR檢測(cè)。以 35S 啟動(dòng)子序列設(shè)計(jì)引物，未侵染組織及農(nóng)桿菌菌液分別作為陰性對(duì)照及陽性對(duì)照對(duì)。PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖電泳結(jié)果如圖 6-10 所示：M N P 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]云杉未成熟合子胚誘導(dǎo)體細(xì)胞胚胎發(fā)生[J]. 張建偉,王軍輝,李青粉,馬建偉.  林業(yè)科學(xué). 2014(04)
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博士論文
[1]日本落葉松×華北落葉松體細(xì)胞胚胎發(fā)生的生化機(jī)制和分子機(jī)理研究[D]. 張蕾.中國林業(yè)科學(xué)研究院 2008
[2]華北落葉松體細(xì)胞胚胎發(fā)生與遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)建立的研究[D]. 齊力旺.中國林業(yè)科學(xué)研究院 2000

碩士論文
[1]毛果楊組培再生及遺傳轉(zhuǎn)化體系研究[D]. 甄成.東北林業(yè)大學(xué) 2016
[2]基于成熟合子胚外值體的水曲柳高頻體胚發(fā)生研究[D]. 邊磊.東北林業(yè)大學(xué) 2013
[3]基于干細(xì)胞模型的落葉松遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立及優(yōu)化[D]. 朱彩虹.中國林業(yè)科學(xué)研究院 2011
[4]利用胚性愈傷組織進(jìn)行落葉松遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究[D]. 王靜.中國林業(yè)科學(xué)研究院 2007



本文編號(hào)：3027016