發(fā)布時(shí)間：2021-02-09 15:09

　　蒙古沙冬青（Ammopiptanthus mongolicus）是我國西北荒漠區(qū)特有的常綠旱生闊葉灌木,具有很強(qiáng)的抗逆特性。本論文從該植物克隆到兩個(gè)抗逆相關(guān)鋅指蛋白基因AmZFP3和AmZFP4,然后通過表達(dá)特性和轉(zhuǎn)基因擬南芥抗逆性等表型變化對其功能進(jìn)行了鑒定。主要研究結(jié)果如下:（1）利用RT-PCR方法擴(kuò)增到AmZFP3編碼區(qū)cDNA（1101bp）,預(yù)測其編碼蛋白含366個(gè)氨基酸殘基,分子量為40.76KD,等電點(diǎn)為9.09,含有zf-RINGH2結(jié)構(gòu)域及兩個(gè)跨膜區(qū),可能定位于細(xì)胞質(zhì)膜。（2）利用半定量RT-PCR方法進(jìn)行了表達(dá)分析,結(jié)果表明:在蒙古沙冬青幼苗中,AmZFP3的轉(zhuǎn)錄水平在低溫、干旱和鹽脅迫處理2 h～48 h期間有不同程度的上調(diào),而在高溫處理期間基本不變;在野外自然條件下生長的蒙古沙冬青嫩葉中,該基因在寒冷的秋冬季節(jié)表達(dá)量高于溫?zé)岬拇合募竟?jié),尤其在12月份轉(zhuǎn)錄水平最高;在春季野外生長植株不同器官中,該基因在嫩葉和嫩根中轉(zhuǎn)錄水平最高,而在嫩枝、花朵和未成熟果莢中轉(zhuǎn)錄水平較低。（3）將AmZFP3編碼區(qū)cDNA片段連接到植物超表達(dá)載體pCAMBIA3300上并轉(zhuǎn)化野生型... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 引言
    1.1 鋅指蛋白的結(jié)構(gòu)與類型
        1.1.1 RING型鋅指蛋白研究進(jìn)展
        1.1.2 A20/AN1型鋅指蛋白SAPs研究進(jìn)展
    1.2 沙冬青抗逆性研究進(jìn)展
    1.3 本研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 野外取樣
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)所用試劑、酶及其他材料
        2.1.4 所用引物序列
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 溶液及試劑的配制
        2.2.2 植物材料脅迫處理
        2.2.3 總RNA提取及cDNA合成
        2.2.4 基因克隆和測序
        2.2.5 蛋白基本特征分析
        2.2.6 基因表達(dá)分析
        2.2.7 植物表達(dá)載體構(gòu)建
        2.2.8 擬南芥的轉(zhuǎn)化
        2.2.9 轉(zhuǎn)基因擬南芥的篩選與繁殖
        2.2.10 轉(zhuǎn)基因擬南芥的抗逆性鑒定
        2.2.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 AmZFP3基因的克隆與功能鑒定
        3.1.1 總RNA的提取與檢測
        3.1.2 AmZFP3編碼區(qū)cDNA的克隆
        3.1.3 AmZFP3蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測
        3.1.4 AmZFP3在蒙古沙冬青中的表達(dá)分析
        3.1.5 AmZFP3轉(zhuǎn)基因擬南芥的獲得及其抗逆性鑒定
    3.2 AmZFP4基因的克隆和表達(dá)分析
        3.2.1 AmZFP4編碼區(qū)cDNA的克隆
        3.2.2 AmZFP4蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測
        3.2.3 AmZFP4在蒙古沙冬青中的表達(dá)分析
4 討論
    4.1 AmZFP3可能編碼RING-H2型鋅指蛋白
    4.2 AmZFP3可能在蒙古沙冬青抵抗逆境中起重要作用
    4.3 AmZFP4可能編碼A20/AN1脅迫相關(guān)蛋白
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡介



本文編號：3025826