發(fā)布時間：2021-01-30 05:38

　　自然界中,寄生蜂主要利用嗅覺來進行信息交流,并在寄主定位、尋找配偶、產(chǎn)卵定位、躲避有害物質(zhì)中發(fā)揮著重要作用。寄生蜂的嗅覺系統(tǒng)中,存在多種嗅覺蛋白,其中氣味結(jié)合蛋白（OBPs）與氣味分子的結(jié)合為寄生蜂和外界氣味物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)的第一步。為了研究川硬皮腫腿蜂（SclerodermasichuanensisXiao）的嗅覺機制,明確其氣味結(jié)合蛋白與寄主及環(huán)境揮發(fā)性氣味物質(zhì)的結(jié)合能力。本文利用已知的川硬皮腫腿蜂氣味結(jié)合蛋白OBP1和OBP2基因序列,設(shè)計特異性引物,重組質(zhì)粒表達并純化OBP1、OBP2蛋白,隨后對純化后的蛋白進行結(jié)合特性研究,同時利用“Y”型嗅覺儀測定雌成蜂對揮發(fā)性氣味物質(zhì)的趨性行為反應(yīng),分析兩種氣味結(jié)合蛋白的結(jié)合特性與腫腿蜂識別氣味的關(guān)系。主要研究成果如下:（1）利用NCBI上登錄的川硬皮腫腿蜂OBP1、OBP2基因序列,設(shè)計特性行引物,成功表達并純化了 OBP1、OBP2蛋白,分別獲得大小約為18kDa和20kDa的高純度蛋白。（2）利用熒光競爭結(jié)合試驗,解析了川硬皮腫腿蜂OBP1、OBP2與18種揮發(fā)性氣味配體的結(jié)合能力。研究結(jié)果顯示,OBP1、OBP2均主要與萜烯類化合物具... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２昆蟲嗅覺識別過程１５９１??Ｆｉｇ．２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｖｉｅｗ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｏｄｏｒａｎｔ?ｐｅｒｃｅｐｔｉｏｎ?ｐｒｏｃｅｓｓ?ｉｎ?ｉｎｓｅｃｔｓ１５９１??

５．１．３?〇ＢＰ１和ＯＢＰ２與ｐ￡Ｔ－２８ａ（＋）載體構(gòu)建重組質(zhì)粒??將ＰＣＲ擴增好的ＯＢＰｌ、０ＢＰ２進行膠回收，連接到ｐＭＤ？１９－Ｔ?Ｖ轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞￡．?ｃｏ／／ＤＨ５ｏｔ，后經(jīng)藍白斑篩選并提質(zhì)粒測序驗證ａ的質(zhì)粒０ＢＰ１、ＯＢＰ２和ｐＥＴ－２８ａ（＋）用限制性內(nèi)切酶Ｓａｃ?Ｉ、Ｘｈｏ?Ｉ害Ｉ，隨后構(gòu)建重組質(zhì)粒，將重組質(zhì)粒０ＢＰ１／?ｐＥＴ?－２８ａ（＋）與０ＢＰ２／?ｐＥ３０??

化到ＤＨ５ａ感受態(tài)細胞，經(jīng)藍白斑篩選后，挑取３－５個生長較好的陽性單克�。蹋乱后w培養(yǎng)基（含Ａｍｐ）、３７?°Ｃ、２２０?ｒｍｉｎ—１培養(yǎng)過夜，再進行重組質(zhì)粒的落ＰＣＲ鑒定，測序驗證完成后，提取重組質(zhì)粒。結(jié)果表明重組質(zhì)粒序列正確，??構(gòu)建表達載體成功。??

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[3]銅綠麗金龜氣味結(jié)合蛋白功能分析[D]. 趙瑩.西北農(nóng)林科技大學 2014
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本文編號：3008350