生長(zhǎng)素響應(yīng)因子(auxinresponsefactor,ARF)屬于多基因家族,其中擬南芥的ARF1能影響開花、雄蕊發(fā)育、花器脫落和果實(shí)開裂以及根部的生長(zhǎng)�，F(xiàn)有的研究多以草本植物為對(duì)象,對(duì)其在木本植物中的功能研究很少。木霉菌是世界公認(rèn)的環(huán)保型生防因子,不僅具有土壤污染修復(fù)作用,還能促進(jìn)植物生長(zhǎng),對(duì)植物的多種病害具有防御作用。本研究以山新楊A(yù)RF1過表達(dá)組培苗(PodaARF1-H)為試材,野生苗(Poda-W)為對(duì)照,接種木霉菌(T)、細(xì)鏈格孢菌(A)以及混合接種2種真菌(TA)48h后,分析2種組培苗內(nèi)源激素含量變化及與不定根生長(zhǎng)、抗性相關(guān)的激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中關(guān)鍵基因的差異表達(dá),從而揭示木霉菌促進(jìn)PodaARF1-H生長(zhǎng)和提高其對(duì)病原菌抗性的激素分子調(diào)控模式,主要研究結(jié)果為:1.對(duì)PodaARFl與PodaARF1-InR培養(yǎng)發(fā)現(xiàn),ARF1過表達(dá)能使山新楊生長(zhǎng)加快,并能顯著增加山新楊不定根數(shù)量,從而有利于其吸收水分和營(yíng)養(yǎng),增強(qiáng)穩(wěn)定性,貯存和合成有機(jī)物質(zhì)。而ARF1抑制表達(dá)之后,山新楊的生長(zhǎng)受到抑制且不定根數(shù)量明顯降低。2.對(duì)激素含量測(cè)定發(fā)現(xiàn),PodARF1-H與Poda-W相比IAA、JA和SA含量普遍升高,并且PodaARFl-H植株的處理組中激素含量變化較大,說明ARF1過表達(dá)能促進(jìn)山新楊生長(zhǎng)并能提高植株對(duì)外界刺激響應(yīng)的敏感性,從而更快地作出防御反應(yīng)。此外,PodaA-W和PodaARF1-H組培苗的三個(gè)處理組中IAA、JA和SA含量均普遍提高,說明根際定殖木霉菌與在功能葉上接種細(xì)鏈格孢菌在短時(shí)間內(nèi)(48h)有利于山新楊組培苗生長(zhǎng)和提高植株抗性。3.葉片組織化學(xué)染色結(jié)果發(fā)現(xiàn),NBT和DAB染色中PodaARF1-H葉片顯色較Poda-W淺,說明ARF1過表達(dá)能夠通過降低植株體內(nèi).O2-和H2O2的積累來提高山新楊抗氧化能力。EvansBlue染色中,PodaARF1-H葉片顏色較Poda-W深,說明ARF1過表達(dá)能夠提高植株對(duì)外界刺激的敏感性。此外,山新楊根際接種木霉菌或功能葉上接種病原菌初期能增強(qiáng)植物防御反應(yīng)。4.Poda-W在三個(gè)處理組中莖尖、被處理功能葉和根部的基因表達(dá)模式無規(guī)律性變化。而在PodaARF1-H植株的莖尖中在T組中IAA、JA和SA相關(guān)基因大部分為上調(diào)表達(dá),而在A組中JA和SA相關(guān)基因多數(shù)為下調(diào)表達(dá);被處理功能葉和根中在T組中JA和SA信號(hào)相關(guān)基因多數(shù)為下調(diào)表達(dá),而在A組中這些基因均為顯著上調(diào)表達(dá)。說明在接種短時(shí)間內(nèi)ARF1過表達(dá)改變了抗性相關(guān)基因的表達(dá)模式,提高山新楊對(duì)木霉和細(xì)鏈格孢菌刺激響應(yīng)的敏感性。并且,PodaARF1-H植株對(duì)細(xì)鏈格孢菌的反應(yīng)更為敏感。5.將山新楊組培苗移栽到土壤中后發(fā)現(xiàn),木霉菌能夠增加山新楊幼苗的高度和葉片數(shù)量,并能減少葉枯病對(duì)植株造成的傷害。
【學(xué)位單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S792.11
【部分圖文】：

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２．３．１．２?ＰｏｄａＡＲＦｌ?ｑＲＴ－ＰＣＲ＾ｉｌ??采用改良的ＣＴＡＢ法對(duì)山新楊總ＲＮＡ進(jìn)行提取，去除ＤＮＡ，得到三條條帶，其中??５ｓ比較模糊，１８ｓ、２８ｓ條帶較亮，且２８ｓ的亮度接近１８ｓ的兩倍，如圖２－４。對(duì)ＲＮＡ反??轉(zhuǎn)錄成ｃＤＮＡ進(jìn)行ｑＲＴ－ＰＣＲ實(shí)驗(yàn)對(duì)基因差異性表達(dá)進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)基因山??新楊與野生型山新楊的相對(duì)表達(dá)量存在明顯的不同。其中中Ｎ０．２與??Ｎ０．６轉(zhuǎn)化子的基因相對(duì)表達(dá)量與接近，我們認(rèn)為在此植株中Ｊ／ＪＦ／表達(dá)量沒有??改變，認(rèn)定該植株轉(zhuǎn)化失敗，其他四個(gè)轉(zhuǎn)化子中」沿＾的相對(duì)表達(dá)量都比Ｗ高，其中??Ｎ０．３轉(zhuǎn)化子比野生型顯著提高了?１．８９倍，因此認(rèn)為這四株組培苗轉(zhuǎn)化成功。??ＩｎＲ中只有Ｎ０．４的基因相對(duì)表達(dá)量與Ｐｏ而－Ｗ接近，認(rèn)定該植株轉(zhuǎn)化失敗，其余５個(gè)植??株的基因相對(duì)表達(dá)量都比野生型低很多，其中Ｎ０．１的相對(duì)表達(dá)量只有０．１３，所以我們認(rèn)??定這５株山新楊也轉(zhuǎn)化成功。此ｑＲＴ－ＰＣＲ驗(yàn)證結(jié)果與普通ＰＣＲ的驗(yàn)證結(jié)果一致。??ｔ?ＣＵＤ?ＮＯ．Ｉ??、■〇？：??２．０?－?丁?ＩＺＺＤ?ＮＯ－３??Ｔ?畫
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2854301