【摘要】：本研究通過對對照組自然生長的橡膠樹紅根病病菌GP020菌株和進行低濃度己唑醇脅迫12小時處理后的菌絲,使用酚抽提法,提取蛋白,并通過FASS方法進行酶解及ITRAQ染料標記,之后進行Ph-RP液相分離及RPLC-MS液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用,并使用生物信息學軟件及數(shù)據(jù)庫,分析所得到的肽段信息,并通過Uniprot及RNA-Sequecing數(shù)據(jù)庫進行檢索,對蛋白質(zhì)進行注釋和分析。通過iTRAQ技術的篩選和鑒定,對蛋白質(zhì)進行相對定量,共得到譜圖147663張,通過proteinpilot軟件進行分析后,Unique匹配到的譜圖數(shù)量為49236張,共鑒定到31853個Unique肽段,3241個蛋白豐度差異倍數(shù)達到1.3倍以上,268個蛋白表達出現(xiàn)差異,通過KEGG信號通路分析,差異表達蛋白分布于146個信號通路中,其中上調(diào)表達蛋白121個,下調(diào)表達蛋白147個。以CK為對照組,顯著富集的pathway通路分別是:能量代謝中的碳代謝、糖酵解/糖異生能力、二羧酸代謝、三羧酸循環(huán),氨基酸生物合成和核糖體代謝。說明農(nóng)藥脅迫下橡膠樹紅根病菌發(fā)生了復雜的應激反應。信號轉導途徑中,HIF-1、RIG-I-like receptor、MAPK、FoxO及NOD-like receptor等5個信號通道中有5蛋白表達上調(diào),與GO分析和COG分析一致。一個SGT1-like蛋白在受脅迫的橡膠樹紅根病病菌中表達明顯上調(diào)1.62倍,與之貫穿的蛋白質(zhì)組-轉錄組聯(lián)合分析結果也印證了這一上調(diào)表達趨勢,其上調(diào)表達推測是橡膠樹紅根病菌受到己唑醇脅迫后的耐藥性應激反應,可能與橡膠樹紅根病菌對己唑醇的基礎耐藥性(basal fungicide tolerance)有關。
【學位授予單位】：海南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S763.7
【圖文】：

圖１邋ｉｔｒａｑ原理示意圖逡逑Ｆｉｇ．邋１邋ｉｔｒａｑ邋Ｔｈｅｏｒｙ邋Ｓｋｅｔｃｈ邋Ｍａｐ逡逑圖１邋（圖片來源于網(wǎng)絡ｈｔｔｐ：／／胃．ｆｉｔｇｅｎｅ．邋ｃｏｍ／）過程是ｉＴＲＡＱ定量蛋白質(zhì)組逡逑學原理，該圖顯示了邋ｉＴＲＡＱ定量技術的基本原理及主要步驟，ｉＴＲＡＱ定量方法最多可逡逑Ｗ在一次串聯(lián)質(zhì)譜操作中同時比較八個樣品中的蛋白的相對含量，主要步驟如圖中所逡逑示，分別為蛋白提取、膜蛋白酶水解、Ｌ油ｅｌ標記、樣品混合、化ｇｈ邋ｐＨ反相色譜預逡逑分離、液相串聯(lián)質(zhì)譜分析。在一級質(zhì)譜時，平衡基團可Ｗ確保無論用哪種報告離子標逡逑記膚段，都顯示為相同的質(zhì)荷比值。在二級質(zhì)譜時，平衡基團發(fā)生中性丟失，而報告逡逑離子的強度則可Ｗ反映r藍蔚南嘍苑岫戎�。唾Z兇釹路轎徽牛停櫻停悠淄跡嶙晡義獻永胱又屎殺戎擔葑拔胱憂慷�。８个彩色峰表是G椋裕遙粒咽約戀模鋼直ǜ胬胱櫻義掀涓叨確直鶇砹死叨蔚南嘍院

本文編號：2795103