【摘要】：濕地松(Pinus elliottii)自上世紀30年代引種至今,已成為我國南方造林的主要樹種,然而滯后的良種繁育技術依舊制約其發(fā)展。隨著現(xiàn)代生物技術的高速發(fā)展,植物組織離體培養(yǎng)和體細胞胚胎胚發(fā)生技術具有繁殖快、周期短、高效、穩(wěn)定等優(yōu)點,為濕地松快繁提供有力的技術支撐。目前國內(nèi)外很多學者都做過這方面的研究并取得了成功,建立了胚胎發(fā)生和植株再生體系,然而在濕地松體胚技術中,目前還存在胚性誘導率低,增殖不穩(wěn)定等問題。本研究以濕地松未成熟合子胚為外植體,采用L9(3~4)正交設計試驗和單因素試驗,研究了基本培養(yǎng)基(LP、DCR和LM),不同濃度植物生長調(diào)節(jié)激素2,4-D和6-BA的組合,不同接種方式對不同采集期的4個濕地松基因型濕地松體胚組織誘導和增殖的影響。試驗初步建立了體胚誘導和增殖體系,篩選出最佳的胚性愈傷組織誘導和增殖的條件。同時試驗對濕地松誘導出的愈傷組織進行了顯微觀察以及內(nèi)源激素測定,從形態(tài)細胞學以及生理生化上,對胚性與非胚性愈傷組織做了區(qū)分。并利用碘-碘化鉀染色對濕地松胚性愈傷組織中早期原胚組織進行觀察,揭示了早期原胚發(fā)育過程。結(jié)果表明:最適宜的采種時期為6月下旬到7月上旬,即合子胚處于發(fā)育的第1~4階段。參試的4個基因型的胚性愈傷組織誘導率有差異,基因型F-B、F-C、F-D最高胚性誘導率分別為13.33%、6.67%、13.33%,平均胚性誘導率分別為3.25%、4.33%、3.25%,但F-A僅在6月24日誘導出了2個胚性愈傷組織,平均誘導率僅為0.667%,最高胚性誘導率為6.67%,不適宜作為體胚誘導的材料�；九囵B(yǎng)基對胚性愈傷組織誘導率有極顯著差異,參試的各時期所有基因型僅在DCR培養(yǎng)基上誘導出了胚性愈傷組織,并且DCR培養(yǎng)基上非胚性愈傷組織誘導率均比LP和LM培養(yǎng)基高,說明不論是濕地松的胚性還是非胚性愈傷組織的誘導,DCR培養(yǎng)基為最適宜的基本培養(yǎng)基。在9種培養(yǎng)基組合中,愈傷組織誘導率最高的為:DCR+2.2 mg/L2,4-D+2.2mg/L6-BA。接種方式對胚性愈傷組織誘導影響大,本試驗選取7月14日到8月11日5個采集時期的球果幼胚為外植體,研究結(jié)果顯示:在這5個時期中,以帶雌配子體方式比直接胚接入的方式,胚性愈傷組織誘導率更高。胚性愈傷組織呈現(xiàn)白色、半透明粘液狀,少部分質(zhì)地疏松、顆�；癄�,為胚性愈傷組織,在顯微鏡下可觀察到,愈傷組織表面有許多伸出的絲狀物,在顯微鏡下可觀察到胚性細胞由小而密集的胚頭細胞和長的空泡化的胚柄細胞組成,整體細胞較小,排列緊密,經(jīng)碘-碘化鉀染色后,可觀察到胚性細胞質(zhì)濃密,細胞核大且易被染色,其中胚頭細胞呈現(xiàn)黃色,具有高活性分生組織中,細胞有絲分裂活躍,愈傷組織增殖較快,胚柄細胞呈現(xiàn)大的液泡化狀態(tài)、染色后,孤立的細胞核獨立于細胞中。非胚性愈傷組織為淺白色、乳黃色或黃褐色顆粒狀,表面疏松,不規(guī)則狀,在顯微鏡下可觀察到,愈傷組織整體由很多大小差不多的圓球狀細胞組成,細胞間差異較大,細胞較大,排列疏松,無規(guī)則,經(jīng)碘-碘化鉀染色后,可觀察到細胞核小,具有大液泡,細胞質(zhì)少,不易被染色。在生理生化上,其中內(nèi)源激素的含量上也有差異,本試驗研究發(fā)現(xiàn),除ABA含量,胚性愈傷組織中的含量高于非胚性愈傷組織外,其他三種激素IAA、ZR、GA3的含量,均為非胚性愈傷組織高于胚性愈傷組織。推斷高濃度的ABA和低濃度的IAA、ZR、GA3可以利于胚性愈傷組織的形成。利用碘-碘化鉀染色對濕地松胚性愈傷組織中早期原胚組織進行觀察,發(fā)現(xiàn)濕地松胚性愈傷組織起源于合子胚胚軸,胚性細胞由兩類細胞組成,一種是細胞質(zhì)濃厚的胚頭細胞,一類是具有大液泡透明的較長胚柄細胞。胚性細胞包含原胚團Ⅰ、原胚團Ⅱ和原胚團Ⅲ以及一些游離的細胞團。
【學位授予單位】：江西農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S791.246
【圖文】：

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本文編號：2786863