【摘要】：楊樹(shù)炭疽病是楊樹(shù)上的重要病害之一,近年來(lái)在我國(guó)局部地區(qū)發(fā)生嚴(yán)重,造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本研究以楊樹(shù)上的膠孢炭疽菌和隱秘刺盤孢為靶標(biāo)菌,研究了其對(duì)4種常用殺菌劑的敏感性,評(píng)估了楊樹(shù)炭疽病菌對(duì)多菌靈的抗藥性風(fēng)險(xiǎn),并初步探究了膠孢炭疽菌對(duì)多菌靈的抗性分子機(jī)制。該研究結(jié)果為林業(yè)上科學(xué)用藥防治炭疽病、制定合理的抗藥性策略提供科學(xué)指導(dǎo),同時(shí)為建立抗性菌株的分子檢測(cè)技術(shù)奠定一定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1.采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了分離自楊樹(shù)炭疽病病葉的59株膠孢炭疽菌和4株隱秘刺盤孢對(duì)多菌靈、苯醚甲環(huán)唑、三唑酮和戊唑醇4種殺菌劑的敏感性。結(jié)果表明:膠孢炭疽菌對(duì)多菌靈的敏感性頻率分布呈連續(xù)單峰曲線,表明尚未出現(xiàn)敏感性下降的群體;而對(duì)苯醚甲環(huán)唑和戊唑醇的敏感性頻率分布呈現(xiàn)雙峰,表明已出現(xiàn)敏感性下降的群體;不同寄主來(lái)源的膠孢炭疽菌對(duì)同種殺菌劑的敏感性之間無(wú)顯著差異(P0.05)。2.室內(nèi)經(jīng)過(guò)藥劑誘導(dǎo)獲得5個(gè)膠孢炭疽菌抗性菌株和4個(gè)隱秘刺盤孢抗性菌株,ECs0值介于6.5852～39.0251μg/mL,抗性水平介于115～573之間,突變頻率高,抗性水平高,表明楊樹(shù)炭疽病菌對(duì)多菌靈的抗藥性容易產(chǎn)生。在無(wú)藥的PDA培養(yǎng)基上連續(xù)繼代培養(yǎng)十代后,5個(gè)膠孢炭疽菌抗性菌株對(duì)多菌靈的敏感性相對(duì)穩(wěn)定,表明其抗藥性可以穩(wěn)定遺傳,而4個(gè)隱秘刺盤孢抗性菌株中有3個(gè)抗性菌株抗性水平有下降趨勢(shì)。3.通過(guò)對(duì)抗性菌株的部分生物學(xué)性狀進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)膠孢炭疽菌抗性菌株的菌絲生長(zhǎng)速率與親本相比明顯減弱,而產(chǎn)孢能力、孢子萌發(fā)率及致病力方面與親本菌株沒(méi)有明顯差異:而隱秘刺盤孢抗性菌株與親本菌株相比,其主要生物學(xué)性狀發(fā)生不同程度變化。4.交互抗藥性研究結(jié)果表明:多菌靈與嘧菌酯、苯醚甲環(huán)唑、三唑酮、戊唑醇、乙霉威、百菌清等6種不同作用機(jī)制殺菌劑之間無(wú)交互抗藥性,與苯甲酰胺類殺菌劑苯酰菌胺之間存在明顯的正交互抗藥性。5.對(duì)抗性菌株的β3-tubulin1和β-tubulin2基因進(jìn)行全序列擴(kuò)增,并與敏感菌株進(jìn)行比對(duì)分析。氨基酸序列比對(duì)結(jié)果表明,其中4個(gè)抗性菌株(Y3-6-D1、Y3-6-D2、BH9-1-D4、YP1-7-D1)的β-tubulin1和β-tubulin2氨基酸序列與其親本的均一致,一個(gè)抗性菌株(2C5-3-D1)的β-tubulin2的第198位氨基酸由谷氨酸(E)變?yōu)橘嚢彼?K)。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)測(cè)定β-tubulin1和β-tubulin2在抗性菌株中的相對(duì)表達(dá)量。表達(dá)量分析表明:4個(gè)抗性菌株(Y3-6-D1、Y3-6-D2、BH9-1-D4、YP1-7-D1)的β-tubulin1基因相對(duì)表達(dá)量顯著增加,而抗性菌株2C5-3-D1的β-tubulin1和β-tubulin2基因的相對(duì)表達(dá)量與親本相比均沒(méi)有顯著性差異。
【圖文】：

值和最大ＥＣ５Ｑ值分別相差３．５、１６．４、２７．７和１２．６倍，平均￡（：５0值分別為（０．０６６４±０．０１３１）、逡逑（０．３７４１±０．２５４８）、（０．６８１２±０．４４２１）和（１９．８２±６．２００）噸／ｍＬ。膠孢炭疽菌對(duì)多菌靈的敏感逡逑性頻率分布呈連續(xù)單峰曲線（圖２－１Ａ），可將該平均ＥＣ５0值（０．０６６４±０．０１３１）邋ｇｇ／ｍＬ逡逑作為膠孢炭疽菌對(duì)多菌靈的敏感基線；而對(duì)苯醚甲環(huán)唑和戊唑醇的敏感性頻率分布則逡逑均出現(xiàn)了不同程度的分化，呈雙峰曲線（圖２－１Ｂ和圖２－１Ｃ），表明己出現(xiàn)敏感性下逡逑降的群體。逡逑１３逡逑

２．２．３膠孢炭疽菌對(duì)４種殺菌劑敏感性的相關(guān)性逡逑分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，５９株膠孢炭疽菌對(duì)４種殺菌劑的敏感性表現(xiàn)出一定的相關(guān)性。逡逑其中，苯醚甲環(huán)唑和戊唑醇之間存在顯著正相關(guān)性（ｐ＝０．６６５５，ＪＰ＜０．０００１）（圖２－３邋Ａ），逡逑戊唑醇與三唑酮之間存在一定的相關(guān)性（＞＝０．４８９６，ＰＣ０．０００１）（圖２－３Ｂ），，但苯醚逡逑甲環(huán)唑與三唑酮和多菌靈之間均無(wú)顯著相關(guān)性（Ｐ＞０．０１）（圖２－３Ｃ和圖２－３Ｄ）。逡逑１６逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S763.7

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本文編號(hào)：2633691